濾泡輔助性T細胞有免疫性血小板減少癥中的表達及其致病作用的研究.pdf

1、目的:免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia，ITP)，是一種自身免疫性出血性疾病，以體內(nèi)抗血小板抗體增多致使血小板破壞過多而導致的出血為特點。ITP所致的出血約占出血性疾病總數(shù)的30％，任何年齡層均可發(fā)病，兒童、成人發(fā)病無差別。ITP目前尚無根治性治療方法，目前臨床常用藥物如糖皮質(zhì)激素、靜注人免疫球蛋白、免疫抑制劑及脾切除等，都效果短暫，難以達到理想的長期緩解。激素作為治療成人ITP的首選用藥，雖然有效率達

2、70％～80％，但長期緩解率僅有46.15％.Cohen等調(diào)查發(fā)現(xiàn)血小板低于30×109/L的ITP患者致命性出血的發(fā)生率有1.62％～3.89％，使得ITP患者的生活質(zhì)量甚至低于癌癥患者。因此，研究ITP的發(fā)病機制并展開有效的靶向治療是改善預后的關(guān)鍵措施。
　　 傳統(tǒng)觀念認為在體液免疫中，B細胞過度增殖、活化和成熟產(chǎn)生多種針對血小板的自身抗體，導致血小板破壞增加是ITP發(fā)病的中心機制。但近年來越來越多的研究顯示，CD4+T細胞

3、異常所致的免疫調(diào)節(jié)機制異?？赡懿攀荌TP發(fā)病的始動因素。CD4+T細胞通過其亞群功能和亞群數(shù)量比例的異常，向B細胞提供異常輔助信號，致使B細胞病理性激活，參與到ITP發(fā)病的體液免疫反應(yīng)中。
　　 根據(jù)CD4+T淋巴細胞表型和分泌細胞因子的不同，將其分為Th1、Th2、Th17、Tfh和Treg細胞亞群。其中，Th1細胞可促進細胞介導的免疫應(yīng)答;Th2細胞可增強抗體介導的免疫應(yīng)答;Th17細胞可介導炎性反應(yīng)、自身免疫性疾病、移植排

4、斥和腫瘤等的進展;Treg細胞能抑制自身反應(yīng)性T、B細胞的活化和增殖及自身抗體的產(chǎn)生。近年來有研究報道:在ITP患者Th1/Th2比例高（主要是由于Th2細胞減少所致）、Treg細胞數(shù)量減少[1]，這表明ITP患者的CD4+T細胞亞群比例和功能存在異常。
　　 方法:本實驗通過應(yīng)用RQ-PCR和ELISA方法，收集河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院初次診斷的ITP患者40例，設(shè)為初治組;38例患者經(jīng)治療后血小板恢復正常，認定為治療完全反應(yīng)組。

5、其中12例應(yīng)用標準治療量糖皮質(zhì)激素（簡稱激素）治療，16例應(yīng)用大劑量激素沖擊治療，10例應(yīng)用激素合并靜注人免疫球蛋白(IVIG)治療;經(jīng)正規(guī)治療后復發(fā)者10例，設(shè)為復發(fā)組;選取與其性別年齡相當?shù)恼φ战M30例。應(yīng)用PQ-PCR檢測各組單個核細胞(PBMC)中Bcl-6mRNA的表達水平，應(yīng)用ELISA方法檢測血清中IL-21蛋白的表達水平。
　　 結(jié)果:1、Bcl-6mRNA的表達情況
　　 RQ-PCR結(jié)果顯示:外周

6、血PBMC中Bcl-6mRNA在初治組、完全反應(yīng)組、復發(fā)組、正常對照組的相對表達量分別是:(3.83±1.00)、(2.09±0.74)、(3.42±0.64)和(1.04±0.41)。所有ITP患者Bcl-6mRNA的相對表達水平均升高，與正常對照組相比差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）;治療后Bcl-6mRNA水平下降，但仍高于正常對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);復發(fā)患者Bcl-6mRNA又升高，表達水平與初治組無統(tǒng)

7、計學差異（P＞0.01）。完全反應(yīng)組中，應(yīng)用標準治療量激素治療、大劑量激素沖擊治療、激素及靜注人免疫球蛋白聯(lián)合治療后Bcl-6mRNA相對表達量分別是(2.11±0.69)、(1.97±0.86)、(2.24±0.60)，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.01)。
　　 2、IL-21蛋白的表達情況
　　 ELISA顯示:初治組、完全反應(yīng)組、復發(fā)組、正常對照組的IL-21蛋白的含量是:(167.37±14.20)pg/ml、(1

8、21.93±9.96)pg/ml、(163.47±10.84)pg/ml和(91.00±33.09)pg/ml。所有ITP患者血清中IL-21蛋白的含量均升高，與正常對照組比較均具有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）;治療后IL-21水平下降，但仍高于正常對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);復發(fā)患者IL-21又升高，表達水平與初治組無統(tǒng)計學差異（P＞0.01）。其中完全反應(yīng)組中，應(yīng)用標準治療量激素治療、大劑量激素沖擊治療、激素及靜注人

9、免疫球蛋白聯(lián)合治療后IL-21蛋白含量分別是(123.08±9.51)pg/ml、(122.31±11.22)pg/ml、(119.66±18.63)pg/ml，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.01)。
　　 3、ITP患者PBMC中Bcl-6mRNA的表達量與血清中IL-21蛋白水平的相關(guān)性
　　 Pearson相關(guān)分析顯示，初治組ITP患者Bcl-6mRNA的表達量和血清中IL-21蛋白的表達呈顯著正相關(guān)(r=0.510，

10、p=0.001)復發(fā)組Tfh細胞Bcl-6mRNA的表達量和血清中IL-21蛋白的表達無相關(guān)性(γ=0.355，P=0.434)。
　　 4、ITP患者血小板水平與Bcl-6mRNA及IL-21的相關(guān)性
　　 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析:初治組和復發(fā)組血小板計數(shù)與外周血PBMC中Bcl-6mRNA的表達水平均無相關(guān)性(r=0.202，P=0.231;r=0.097，P=0.903)。初治組和復發(fā)組血小板計數(shù)與血清中IL-

11、21的含量均無相關(guān)性(r=0.059,P=0.730;r=0.869,P=0.131)。
　　 結(jié)論:
　　 1、在ITP患者，PBMC中高表達Bcl-6mRNA說明Tfh細胞參與了ITP的發(fā)病過程。
　　 2、Tfh細胞可能通過其主要效應(yīng)因子IL-21的高表達誘導B細胞的增殖和分化，進而促進ITP患者體液免疫反應(yīng)的激活。
　　 3、大劑量激素可能抑制了Tfh細胞向濾泡遷移，進而抑制B細胞過度活化，減少血