Th17細(xì)胞在免疫性血小板減少癥中的表達(dá)及致病機(jī)制研究.pdf

1、目的:免疫性血小板減少癥（immunethrombocytopenicpurpura，ITP）是一種常見的獲得性出血性自身免疫性疾病，主要發(fā)生機(jī)制認(rèn)為是體液免疫異常引起患者體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)血小板膜表面糖蛋白的自身抗體所致。近幾年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞免疫異常在ITP發(fā)病中也起著重要作用，Th1(Thelpcell1，Th1)細(xì)胞和Th2細(xì)胞的平衡失調(diào)作為ITP發(fā)病機(jī)制之一已達(dá)共識(shí)。
　　 Th17細(xì)胞是新發(fā)現(xiàn)的效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞亞群，以特異性分

2、泌IL-17A(interleukin17A，IL-17A)為主要特征，發(fā)揮其強(qiáng)大的促炎癥反應(yīng)作用。孤兒受體(orphannuclearreceptor.RORγt)是影響Th17細(xì)胞分化發(fā)育的特異性轉(zhuǎn)錄因子，RORγt增高誘導(dǎo)編碼IL-17細(xì)胞因子基因的表達(dá)增高。現(xiàn)已有大量研究證明Th17細(xì)胞與多種自身免疫性疾病發(fā)病密切相關(guān)，它是否參與了ITP發(fā)病過程，是否與ITP發(fā)病機(jī)制中的Th1/Th2比例失衡存在聯(lián)系，是否可以作為評(píng)估ITP治療

3、和預(yù)后的指標(biāo)，還存在爭(zhēng)議。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定血清中IL-17及外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平間接評(píng)估外周血中Th17細(xì)胞的表達(dá)水平，分析Th17細(xì)胞與ITP發(fā)病的關(guān)系及可能的機(jī)制;并測(cè)定血清中干擾素γ(interferonγ，INF-γ)、IL-2、IL-4水平，以INF-γ/IL-4及IL-2/IL-4評(píng)估Th1/Th2比例水平，進(jìn)一步評(píng)價(jià)三種T細(xì)胞亞群在ITP發(fā)病中的相關(guān)性。

4、　　 方法:取46例初治ITP患者及14例復(fù)發(fā)患者治療前、后的外周血為實(shí)驗(yàn)組，35例健康志愿者外周血為正常對(duì)照組。酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（ELISA法）檢測(cè)各組血漿中IL-17A、INF-γ、IL-2、IL-4的濃度，應(yīng)用實(shí)時(shí)免疫熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-timefluorescencequantitativepcr)的技術(shù)檢測(cè)各組IL-17AmRNA、RORγtmRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組血

5、漿中細(xì)胞因子IL-17A濃度、外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平:初治組及復(fù)發(fā)組患者治療前血漿中IL-17A濃度、單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。但比較初治患者和復(fù)發(fā)難治患者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2、初治組和復(fù)發(fā)組治療前后血漿中細(xì)胞因子IL-17A濃度、外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、R

6、ORγtmRNA表達(dá)水平的變化:46例初治組中的41例患者及復(fù)發(fā)組的14例患者經(jīng)治療后均達(dá)到CR，治療后外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平，血漿中IL-17A濃度與治療前相比降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);46例初治組中有5例患者為NR，其治療前后對(duì)比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 在46例初治患者中，應(yīng)用不同方法（聯(lián)合治療組和激素治療組）治療后，患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL

7、-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平，血漿中IL-17A濃度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)
　　 3、各組血漿中細(xì)胞因子IL-2、INF-γ、IL-4的濃度:初治組及復(fù)發(fā)組患者治療前血漿中IL-2、INF-γ水平高于正常對(duì)照組，而IL-4水平低于正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。復(fù)發(fā)組患者治療前與初治患者治療前相比較，三種細(xì)胞因子的濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4、初治組和復(fù)發(fā)組治療前后

8、血漿中細(xì)胞因子IL-2、INF-γ、IL-4濃度的變化:46例初治組中的41例患者及復(fù)發(fā)組的14例患者經(jīng)治療后均達(dá)到CR，其治療后血漿中IL-2、INF-γ水平與治療前相比降低，IL-4水平比治療前升高，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);46例初治組中有5例患者為NR，治療前后相比血漿中IL-2、INF-γ、IL-4水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 5、46例初治組中治療前血漿中IL-17A與IL-2、INF-γ、

9、IL-4水平做相關(guān)性檢驗(yàn)，IL-17A與IL-2、INF-γ與IL-2之間存在正相關(guān)關(guān)系，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其它因子之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。
　　 6男性和女性患者血漿中IL-17A濃度、外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），與患者年齡及血小板計(jì)數(shù)分別做相關(guān)性檢驗(yàn)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 1、初治組及復(fù)發(fā)組治療前外周血中IL-

10、17AmRNA、RORγtmRNA表達(dá)水平及血漿中IL-17A濃度比正常對(duì)照組增加;但兩組間表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示ITP患者治療前外周血中Th17細(xì)胞其數(shù)量及功能異?？赡軈⑴c了ITP的發(fā)病過程，且Th17細(xì)胞的作用與新發(fā)或復(fù)發(fā)無關(guān)系。
　　 2、初治組及復(fù)發(fā)組治療后達(dá)CR者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平及血漿中IL-17A濃度與治療前相比降低，而治療無效的患者治療前后對(duì)比無明顯差異;46

11、例應(yīng)用不同方法（聯(lián)合治療組和激素治療組）治療后，患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-17AmRNA、RORγtmRNA的表達(dá)水平，血漿中IL-17A濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示治療后患者外周血中Th17細(xì)胞的比例可以作為評(píng)價(jià)ITP療效的指標(biāo)之一，但不能判斷應(yīng)用不同治療方法治療ITP療效的差異。
　　 3、初治組及復(fù)發(fā)組治療前與正常對(duì)照組相比，血漿中IL-17A、IL-2、INF-γ水平增高，而IL-4水平減低，并且IL-17A與IL-2、

12、INF-γ與IL-2之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)正相關(guān)關(guān)系，治療后這種趨勢(shì)有所恢復(fù)。提示Th17、Th1、Th2這三種T細(xì)胞亞群比例失衡可能參與了ITP的發(fā)病過程，表現(xiàn)為Th17、Th1細(xì)胞比例增高，Th2細(xì)胞比例減低，且Th17與Th1細(xì)胞的增高呈正相關(guān)關(guān)系。
　　 4、本研究顯示初治ITP患者外周血中IL-17AmRNA、RORγtmRNA表達(dá)水平、血漿中IL-17A、IL-2、INF-γ、IL-4水平與性別、年齡、治療前血小板計(jì)數(shù)無相關(guān)