2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、由于近年來石油價(jià)格不斷攀升,各個(gè)國家和實(shí)驗(yàn)室都在尋找高效的可再生能源來取代石油這一高耗費(fèi)的能源,比如利用木薯、馬鈴薯淀粉等來生產(chǎn)燃料乙醇。工業(yè)上,淀粉轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟切枰?jīng)過液化和糖化兩個(gè)步驟,這就要求對淀粉原料進(jìn)行高溫蒸煮。基于減少能源消耗和有效利用天然資源的原則,廣大科研人員特別關(guān)注生淀粉的生物能轉(zhuǎn)化過程,并對能降解生淀粉的酶類進(jìn)行研究。
   本研究通過多次連續(xù)富集培養(yǎng),從廣西武鳴縣某淀粉廠附近篩選分離到一株具有較強(qiáng)水解生淀粉

2、能力的細(xì)菌,該菌株革蘭氏染色陽性,細(xì)胞呈桿狀,芽孢為橢圓形。經(jīng)過16SrDNA序列分析,初步鑒定該菌株為類芽孢桿菌屬Paenibacillussp.,命名為Paenibacillussp.WN61。該菌株液體搖瓶發(fā)酵70h后,生淀粉酶活力達(dá)到108.5U/mL,RDA值為57.8%,對木薯生淀粉的吸附率為70.26%,表現(xiàn)出對生淀粉具有較強(qiáng)的降解能力。
   通過飽和(NH4)2S04沉淀、SephacrylS-300層析的方法

3、對Paenibacillussp.WN61所產(chǎn)的生淀粉酶進(jìn)行分離純化,得到純化的酶蛋白比活力為5112.04U/mg,純化倍數(shù)為14.1,相對分子質(zhì)量約為100kDa。該酶以木薯生淀粉為底物時(shí),最適pH值為5.6,最適溫度為50℃。金屬離子Ca2+、Mg2+對該酶具有激活作用,Zn2+、Cu2+、Fe2+、Ni2+、Mnz+、C02+和EDTA對該酶均具有抑制作用。以可溶性淀粉為底物時(shí),該酶的Km值為0.9059mg/mL,Vmax為2

4、59.0umol/mL·min。利用高效液相色譜分析其水解產(chǎn)物,包括麥芽糖、葡萄糖和麥芽三糖,推測該生淀粉酶是一種a-淀粉酶。
   在各種淀粉酶中,大約只有10%的淀粉酶能結(jié)合并降解生淀粉,它們通常具有一個(gè)明顯的序列結(jié)構(gòu)模塊,即淀粉結(jié)合域(SBD)。CBM25是淀粉結(jié)合域中的一類。從土壤富集宏基因組DNA中擴(kuò)增到不包含和包含淀粉結(jié)合域CBM25的B.polymyxaβ-淀粉酶基因,并成功表達(dá)至pSE380載體上,獲得重組質(zhì)粒p

5、SE380-B-amy1和pSE380-B-amy2,以大腸桿菌BL21(DE3)為宿主細(xì)胞大量表達(dá)融合的蛋白。利用鎳離子親和層析柱對BL21(DE3)/pSE380-B-amy1和BL21(DE3)/pSE380-B-amy2表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行純化,SDS-PAGE凝膠電泳表明獲得的純化蛋白相對分子質(zhì)量分別為46kDa和68kDa。酶學(xué)性質(zhì)研究表明,它們的最適溫度均為50℃,最適pH值均為7.0。B-AMY1的Km、Vmax和比活力分

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