麥芽中β-淀粉酶的提取、純化及應(yīng)用研究.pdf

1、植物中提取的β-淀粉酶具有酶活力高，耐熱性好，作用pH范圍廣等特點(diǎn)。本文對(duì)來源于大麥的β-粉酶不但進(jìn)行了提取、純化及酶學(xué)性質(zhì)研究，還對(duì)其應(yīng)用效果進(jìn)行了研究。
　　 通過實(shí)驗(yàn)比較大麥發(fā)芽前后β-淀粉酶活力變化及影響麥芽β-淀粉酶提取主要因素。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken設(shè)計(jì)中的五因素三水平的響應(yīng)曲面分析法，建立了麥芽中β-淀粉酶提取的二次多項(xiàng)數(shù)學(xué)模型，考察了各因素對(duì)β-淀粉酶提取的影響。結(jié)果表明，大麥發(fā)芽第三天β

2、-淀粉酶活力最大；β-淀粉酶提取優(yōu)化工藝條件為:料液比1:17、溫度44℃、緩沖液pH6.4、提取時(shí)間2.3 h，還原劑用量1.64 g/L；在此工藝條件下，每g絕干麥芽提取得到的β-淀粉酶活力為1230.22 U/g絕干麥芽。
　　 麥芽β-淀粉酶粗酶液經(jīng)過硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-650M交換和凝膠過濾HW-55F層析，純化倍數(shù)為21.8倍，回收率為41.1%，最終比活力達(dá)1462.7 U/mg。SDS-PAGE鑒定表明純化

3、后的β-淀粉酶酶為一單一條帶，分子量大小約為60 kDa。純化后β-淀粉酶酶的最適pH值為5.5，在pH4.5-6.5范圍內(nèi)，較為穩(wěn)定；最適溫度為50℃，40-60℃范圍內(nèi)較穩(wěn)定，70℃保溫1 h酶活僅剩6%。10 mmol/L的Mg2+、Ca2+、Zn2+等對(duì)酶活有一定的激活作用，Mn2+、Cu2+、Fe2+等對(duì)酶活有一定的抑制作用，而Na+、K+、NH4+等離子對(duì)酶活影響不大。麥芽中提取的β-淀粉酶熱穩(wěn)定性和pH用范圍要優(yōu)于來源于微

4、生物中的。
　　 以馬鈴薯淀粉為原料，用耐高溫α-淀粉酶進(jìn)行液化，以自制β-淀粉酶與普魯蘭酶糖化制取高麥芽糖漿，確定最佳液化和糖化工藝條件為:淀粉溶液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40%，pH6.3，耐高溫α-淀粉酶為10.2 U/g淀粉，液化時(shí)間為10min，液化溫度為98℃，調(diào)節(jié)糖化液pH5.5，糖化溫度50℃，糖化時(shí)間48h，β-淀粉酶與普魯蘭酶分別添加455.67 U/g淀粉和0.864 PUN/g淀粉。在此條件下，糖化液中麥芽糖含量為68