芽孢桿菌屬

1、1,一、炭疽芽胞桿菌（Bacillus anthracis，B.anthraci ),炭疽是人畜共患的急性傳染病 主要是牛、羊等食草類動物的傳染病，人可通過接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染 皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等， 并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎,2,形態(tài)染色:致病菌中最大的G+桿菌，兩端平切、竹節(jié)狀有毒株可有明顯莢膜,生物學性狀,炭疽芽胞桿菌 亞甲基藍染色 ×1000,革蘭染色 ×

2、;1000,3,芽胞——橢圓形，小于菌體，位于菌體中央多在有氧條件下形成，25～30℃，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動物尸體解剖后暴露在空氣中，都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞，尸 體嚴禁解剖,4,培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，生長條件不嚴格，最適溫 度30～35℃普通培養(yǎng)基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、 無光澤，邊緣不整齊的菌落，低倍鏡下菌落邊 緣呈卷發(fā)狀,5,BAP：12～15h不溶血，18～24h輕微溶血

3、其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速,炭疽桿菌在血瓊脂平板中菌落,6,肉湯—絮狀沉淀生長明膠—37℃18～24h表面液化成漏斗狀，由于細菌沿穿刺線向四周擴散形成倒松樹狀。NaHCO3BAP： --有毒株—5%CO2、37℃24～48h、產(chǎn)生莢膜 呈黏液型菌落，挑取時呈粘絲狀(鑒別要點) --無毒株—粗糙型菌落,7,生化反應：,分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解淀粉、還

4、原硝酸鹽不產(chǎn)生吲哚和硫化氫、不利用檸檬酸鹽、不 分解尿素在牛乳中生長2～4天牛乳凝固→緩慢胨化觸酶（+）、卵磷脂酶弱（+）,8,抗原構(gòu)造：菌體多糖抗原： --與毒力無關(guān)，耐熱、耐腐敗，長時間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生環(huán)狀沉淀反應（Ascoli熱沉淀反應）。 --特異性不高，能與其他需氧芽胞桿菌、14型肺炎鏈球菌、人A血型抗原發(fā)生交叉反應。,9,莢膜多肽抗原： --與毒力有關(guān)，有抗吞噬作用，有利于細 菌生

5、長和擴散 --莢膜腫脹試驗，對本菌鑒定有意義芽胞抗原： 有免疫原性和血清學診斷價值,10,炭疽毒素：--保護性抗原（PA)、致死因子（LF）、水腫 因子（EF）三個組分--單獨皆無致病性，與PA結(jié)合才顯示出致病性--具有抗吞噬和免疫原性,11,抵抗力：,--芽胞抵抗力很強，煮沸10min或干熱140℃ 3h才能殺滅--在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致 病力不減，牧場一旦污染，傳染性可持續(xù)數(shù)

6、十年--生物武器,12,--芽胞對化學消毒劑抵抗力不一，對碘和氧化 劑較敏感，常用以下方法殺菌： 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高錳酸鉀 15min、 0.5%過氧乙酸 10min --對磺胺、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、 氯

7、酶素均敏感,13,臨床意義,炭疽是人畜共患的急性傳染病 主要是牛、羊等食草類動物的傳染病，人可通過接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染 皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等， 并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎,14,致病物質(zhì),莢膜：抗吞噬，有利于細菌在組織內(nèi)繁殖擴散炭疽毒素：保護性抗原、致死因子、水腫因子,15,所致疾病,炭疽?。簜魅驹矗夯疾∈巢輨游锛捌渲破坊虮晃廴疚飩鞑ネ緩剑航佑|——皮膚炭疽

8、 食用——腸炭疽 吸入——肺炭疽可并發(fā)敗血癥，死亡率極高,16,17,乙類傳染病發(fā)生肺炭疽按甲類處理,病后可獲得持久免疫力,18,要求快速檢出、分離鑒定病原菌，以利早期確診、查清疫源、及時治療和采取預防對策,三、微生物學檢驗,19,標本的采集與處理,皮膚炭疽：病灶深部標本肺炭疽：痰和血液腸炭疽：糞、嘔吐物腦膜炭疽：CSF、血液死于敗血癥的動物，嚴禁宰殺和解剖，可消 毒皮膚

9、后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié)。,20,無雜菌污染標本：直接接種肉湯增菌或固體培養(yǎng)基污染雜菌固體標本：加10倍量生理鹽水充分浸泡，振 蕩10～15min 、靜置10min，取懸液65℃水浴30min或 85℃5min殺死雜菌，保留芽胞活性，再增菌和培養(yǎng)污染雜菌液體標本：離心 ，棄上清液后，加0.5%洗滌 劑振蕩10～15min ，離心取沉淀物增菌和分離培養(yǎng),21,生化反應,噬菌體

10、裂解,青霉素抑制,毒力試驗,莢膜腫脹試驗,22,23,涂片染色：--G染色、莢膜染色、芽胞染色—初步報告--莢膜熒光抗體染色核酸檢測：核酸雜交分離培養(yǎng)：--BAP、戊烷脒多粘菌素B平板--2%兔血清肉湯增菌→分離培養(yǎng),24,鑒定試驗：形態(tài)和菌落特征生化試驗:表11-1串珠試驗:--接種于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉湯 中，37℃ 6h，大而均勻成串的圓球狀菌體--與青霉素抑制細菌細胞壁合成有關(guān)--

11、類炭疽無此現(xiàn)象,25,青霉素抑制試驗：接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，37℃24h 生長 受抑制不生長 串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗：,,,,兔血瓊脂平板,抑菌環(huán),青霉素紙片,26,噬菌體裂解試驗：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗： 接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的平板， 10%CO2、37℃、24～48h

12、有毒株形成莢膜—黏液型菌落 無毒株不形成莢膜—粗糙型菌落 動物試驗： 小鼠、家兔或豚鼠皮下接種,27,植物凝集素試驗：Ascoli熱沉淀試驗：可作追溯性診斷,28,,Plaque,29,二、 蠟樣芽胞桿菌(Bacillus cereus, B. cereus ),30,形態(tài)與染色：- G+大桿菌-生長6h后即形成圓形芽胞、位于 菌體中心或次末端、不突出菌體-菌體兩端平截，多數(shù)呈鏈狀排列-引起食物中毒的菌株多

13、有周鞭 毛、無莢膜,微生物特性,31,培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高最適溫度30~35℃普通瓊脂平板：菌落較大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有 蠟樣光澤,32,BAP —有β溶血 卵黃平板—生長迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反應或卵黃反應,33,生化反應：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素、糊 精，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳，液化明膠，VP（+）

14、、卵磷脂 酶（+） 多次傳代后生化特性常可改變,34,抵抗力：耐熱，肉湯中細菌需100℃20min才能殺死，食物中毒菌株的游離芽胞耐受100℃30min、干熱120℃60min才能殺死對氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺、呋喃類耐藥,35,臨床意義,食物中毒含菌量達105/g以上嘔吐型——耐熱腸毒素腹瀉型——不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎,36,夏、秋季多見食物有米飯、乳品、

15、禽畜肉類、果汁飲料等，大多為加熱烹調(diào)過的熟食在米飯中極易繁殖，由米飯受污染引起的食物中毒在國內(nèi)、外均為常見中毒食物大多無腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應引起注意,37,微生物學檢驗,標本采集： 可疑食物、糞便、嘔吐物，因食品暴露于空氣中，在一定程度都會受到本菌污染，所以不能分離出該菌就認為是引起食物中毒的病原菌。,38,確診由該菌引起的食物中毒必須：,從食物中分離出菌數(shù)≥105CFU/g，提示本菌活躍生長，構(gòu)成潛在危險從可

16、疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或)嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型,39,40,檢驗方法：直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計數(shù) 普通瓊脂平板、BAP、卵黃平板鑒定與分型： 根據(jù)菌落特點、形態(tài)染色、生化反應等初步鑒定 生化分型、血清分型、噬菌體分型，腸毒素檢測,41,第五節(jié) 棒狀桿菌屬,42,棒狀桿菌屬是一群革蘭染色陽性桿菌，菌體形態(tài)特征是在其一端或兩端常呈棒狀膨大，故名，歸屬放線菌科。,棒狀桿菌屬概述,43,棒狀桿菌屬種類繁多，

17、主要有：白喉棒狀桿菌（C.diphtheriae）假白喉棒狀桿菌（C.pseudodiphtheriticum）干燥棒狀桿菌（C.xerosis）化膿棒狀桿菌（C.pyogenes）潰瘍棒狀桿菌（C.ulcerans）假結(jié)核棒狀桿菌（C.pseudotuberculosis）溶血棒狀桿菌（C.haemolyticum）J-K群棒狀桿菌（C.jeikeium-CDC group JK）,44,G+桿菌、一端或兩端膨大成棒

18、狀染色不均勻，兩端濃染或有異染顆粒無鞭毛、無芽胞排列不規(guī)則，呈柵欄狀白喉棒狀桿菌——致病菌類白喉棒狀桿菌——條件致病菌,45,白喉棒狀桿菌 C.diphtheriae,46,一、生物學特性,形態(tài)與染色: G +細長微彎的桿菌 一端或兩端膨大呈棒狀 常排列呈V、L、X等文字形 異染顆?！螒B(tài)上的鑒別特征 無莢膜、無芽胞、無鞭毛,白喉棒狀桿菌異染顆粒 1000×,47,培養(yǎng)特性：

19、,需氧或兼性厭氧，最適溫度35～37℃營養(yǎng)要求高，在含血液、血清、雞蛋的培養(yǎng)基上生 長良好呂氏（Loeffler)血清斜面或雞蛋斜面： 生長最快，6h即生長，10～12h長出灰白色、 濕潤、有光澤的光滑型菌苔/菌落，菌體形 態(tài)典型、異染顆粒明顯，連續(xù)傳代可保持形 態(tài)和產(chǎn)毒性能不變,48,BAP中菌落,BAP：菌落灰白色、光滑型、 直徑1～2mm、有狹窄 β溶血環(huán)（輕型）多次傳代后

20、菌體變?yōu)榍?型,49,亞碲酸鉀BAP：選擇鑒別培養(yǎng)基黑色菌落——鑒別依據(jù)不同菌型還原能力不同，呈現(xiàn)黑色或灰黑色 菌落根據(jù)菌落特征及生化反應特點可將本菌分為： 重型、中間型、輕型,白喉棒狀桿菌在亞碲酸鉀BAP中菌落,50,液體培養(yǎng)基：生長較好，但菌型不同其生長特點也不相同,51,生化反應：,分解葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚 （-）、硝酸鹽還原（+）、觸酶（+）、氧化酶

21、（-）、明膠液化（-）尿素（-）重型能分解淀粉、糖原、糊精，遲緩分解蔗糖,52,抵抗力：,對干燥、寒冷和日光抵抗力較其他無芽胞細菌強，在干燥的假膜中可生存3個月對濕熱和消毒劑敏感，5%石炭酸、1：1000升汞1min，100℃1min、60℃10min均可滅菌對青霉素、紅霉素等敏感，對磺胺不敏感,53,致病物質(zhì) (一)白喉外毒素毒力強，130ng/kg可使人死亡抗原性強編碼外毒素的tox基因——β-棒狀桿菌噬菌體,二、臨床

22、意義,54,作用機制： A亞單位可使細胞延伸因子-2（EF-2）滅活，影響蛋白質(zhì)的合成作用特點：毒性作用大，1分子能殺一個細胞作用于多種細胞，心肌、神經(jīng)細胞均有毒素受體腫瘤細胞對此毒素敏感,55,（二）索狀因子細菌表面的一種糖脂，能破壞細胞的線粒體，影響細胞的呼吸與磷酸化（三）K抗原--細胞壁外面的一種不耐熱糖蛋白--抗吞噬--有利于細菌在黏膜表面的定植,56,所致疾?。喊缀?-急性呼吸道傳染病,傳染源：患者及帶

23、菌者傳播途徑：飛沫或污染臨床表現(xiàn)細菌------上呼吸道粘膜， 生長繁殖，產(chǎn)生毒素 細菌與毒素共同作用引起局部炎癥：炎性滲出，壞死，纖維蛋白 →→假膜→→窒息毒素→→血液→→全身中毒癥狀外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困難 聲帶麻痹---聲音嘶啞 軟頜麻痹---吞咽困難心肌---心肌炎,5

24、7,白喉假膜,58,抗毒素免疫感染后機體可獲得牢固的免疫力機體還可通過其它方式獲得免疫力：六月以下嬰兒---------母親成人---------------------隱性感染、人工主動免疫易感者：1~5歲兒童成人---也有可能,免疫性：,59,錫克試驗（Schick test）（白喉外毒素皮內(nèi)試驗）,調(diào)查人群在感染或預防接種后對白喉是否產(chǎn)生免疫力根據(jù)外毒素與抗毒素中和的原理，以少量白喉外毒素測定機體有無相應抗

25、毒素缺點—觀察時間長、操作繁瑣，不易進行廣泛測試,60,錫克試驗,白喉桿菌所含的毒素對機體組織有損傷作用，而引起一系列病理變化。對白喉具有免疫力的個體，血清中有白喉抗毒素，能中和白喉毒素的有害作用。皮內(nèi)注射白喉毒素后，觀察局部皮膚反應，可以判斷受試者是否對白喉有免疫力。 　　于前臂屈側(cè)皮膚乙醇消毒，皮內(nèi)注射白喉毒素，0.1ml，另一側(cè)前臂皮內(nèi)注射等量對照液(經(jīng)加熱80℃，5min處理過的白喉毒素)。24h～48h后觀察結(jié)果。 1．出

26、現(xiàn)下列情況之一為陽性。（1）試驗臂局部皮膚紅腫，第4日直徑可達10mm-20mm，7d-14d開始消退，對照臂無反應。（2）于注射后6h-12h，兩臂同時出現(xiàn)同樣大小的紅斑，顏色較淺，24h后對照臂紅斑開始消退，而試驗臂的皮膚反應繼續(xù)發(fā)展。2．陰性：兩臂注射部位均無反應。3．假陽性：雙臂注射部位6h-12h后同時出現(xiàn)同樣大小的紅斑，顏色較淺，24h后均開始消退。,61,,主要用于檢查人群對白喉的免疫狀態(tài)，也可指導臨床治療。1．陽性：表示

27、機體對白喉無免疫力，應進行白喉疫苗接種，然后再用本試驗測定免疫效果。2．陰性：表示機體已產(chǎn)生了免疫力。3．假陽性：也表示機體對白喉具有免疫力。雙臂注射部位均出現(xiàn)紅斑，屬于機體對白喉毒紊蛋白質(zhì)的變態(tài)反應。4.對于臨床疑診的白喉患者，可同時做本試驗與咽拭子細菌培養(yǎng)，根據(jù)兩種試驗結(jié)果，分別給予不同的處理。（1）白喉桿菌培養(yǎng)陽性，本試驗陰性，按白喉病例處理。（2）白喉桿菌培養(yǎng)與本試驗均陰性，應留觀察。（3）培養(yǎng)陰性，本試驗陽性，應進行預防接種。

28、 疑診白喉，人群白喉免疫狀態(tài)篩查。 局部皮膚感染者。 同狄克試驗。,62,致敏紅細胞凝集試驗測定血清中抗毒素水平0.1ml血清，倍比稀釋+外毒素致敏紅細胞37℃、1h敏感度可達10-4單位，簡便快速,63,防治原則：--人工主動免疫——白喉類毒素DPT混合疫苗：白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風類毒素--人工被動免疫——白喉抗毒素+白喉類毒素--治療：抗毒素+抗生素早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在與細胞結(jié)合以前被抗毒素中和,

29、64,三、微生物學檢驗,分離出白喉桿菌，并證明其毒力 標本采集： 分泌物 取雙份如不能及時檢驗，標本浸于無菌生理鹽水或15%甘油生理鹽水保存,65,毒力試驗,66,直接涂片染色鏡檢：-- 2～3張涂片→G染色、異染顆粒染色 鏡檢——初報“直接涂片檢出形似白喉桿菌”——早期診斷--用無菌棉拭子浸以動物血清，采集標本，37℃10h，涂片染色鏡檢——提高陽性率,67,分離培養(yǎng)：,呂氏血清斜面： 37℃、

30、8～12h →→涂片染色鏡檢--檢出率要比直接涂片高，有助于快速診斷亞碲酸鉀BAP： 37℃、24～48h，黑色菌落BAP： 輕型有β溶血環(huán)，應注意與溶血性鏈球菌鑒別,68,鑒定：,形態(tài)染色、菌落特點、生化反應糖發(fā)酵試驗、尿素酶、硝酸鹽還原 —鑒別棒狀桿菌屬不同的種 白喉：葡萄糖 （+）、麥芽糖 （+） 蔗糖 （-）,69,毒力試驗（鑒定致病菌株的重要依據(jù)）,體外法：