2型豬鏈球菌ZnuA和Hlp重組蛋白的制備及其免疫學特性研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcussuis,S.suis)是重要的人獸共患病病原體,可引起人和豬患腦膜炎、關節(jié)炎、肺炎、敗血癥甚至急性死亡,給養(yǎng)豬業(yè)和從業(yè)人員健康均帶來巨大威脅。1998年和2005年,在我國江蘇省和四川省分別暴發(fā)了S.suis2感染人和豬的公共衛(wèi)生事件,患者中出現國內外罕見的鏈球菌中毒性休克綜合征(STSS)癥狀,該疫情引起了公共衛(wèi)生領域的高度重視。雖然疫苗的研制是控制S.suis感染的重要手段,但是目前尚未開發(fā)出用

2、于預防S.suis感染的有效疫苗。
　　 ABC轉運蛋白在細菌適應外界環(huán)境變化中具有一系列不同的功能,為細菌輸入生存所必需的營養(yǎng)物質,輸出有毒物質。ABC轉運蛋白在一些病原菌的致病過程中起到重要的作用,而且許多定位于細菌表面的ABC轉運蛋白具有免疫原性和免疫保護性。因此,ABC轉運蛋白在疫苗開發(fā)中具有潛在的價值。鋅是細菌生長所必需的一種重要微量元素,鋅的吸收對于細菌在外界環(huán)境和宿主體內的生存、繁殖至關重要。在細菌中,鋅ABC轉運

3、蛋白ZnuABC不僅參與鋅的運輸,還在多種病原菌的致病過程中起到非常重要的作用。
　　 本研究通過生物信息學分析,發(fā)現S.suis2中國強毒株05ZYH33基因組中存在ZnuABC編碼基因,其中細胞表面鋅離子結合蛋白znuA與多種細菌的鋅錳離子結合脂蛋白具有較高的序列同源性。以S.suis2中國強毒株05ZYH33基因組為模板,PCR擴增znuA基因并克隆到pET32a載體并轉化到E.coli,原核表達出ZnuA,并利用His親

4、和層析獲得較高純度的重組蛋白。Westernblot分析和ELISA結果表明,ZnuA具有良好的免疫原性,是一種在S.suis2感染過程中表達的蛋白。流式細胞術結果表明,ZnuA是一個S.suis2菌體表面蛋白。動物實驗結果表明,ZnuA重組蛋白對BALB/c小鼠具有良好的免疫保護作用,ZnuA可作為一個預防S.suis感染的亞單位疫苗候選分子。此外,基于ZnuA重組蛋白,初步建立了S.suis2感染的血清學檢測方法。
　　 本

5、課題組前期研究發(fā)現一個全局性毒力負調控因子CovR,CovR調控多個毒力相關基因的表達,其中溶血素樣蛋白基因hlp的表達發(fā)生上調。本研究的第二部分,首先從05ZYH33基因組中擴增基因hlp,構建重組表達質粒pET32a::hlp,轉化E.coliBL21(DE3),原核表達出Hlp重組蛋白。His親和層析獲得較高純度的Hlp重組蛋白后,利用重組蛋白免疫新西蘭兔,獲得較高效價的抗血清。
　　 以上研究結果為進一步開展ZnuA和h