2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目前,在世界范圍內(nèi),慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)儼然成為了嚴重的公共衛(wèi)生問題之一。流行病學(xué)調(diào)查顯示,CKD在我國成年人群中的發(fā)病率已經(jīng)高達10.8%。CKD臨床主要表現(xiàn)為蛋白尿及腎功能的進行性減退,其發(fā)生發(fā)展機制與足細胞損傷導(dǎo)致的腎小球硬化,小管間質(zhì)的纖維化等密切相關(guān)。因而,如何減輕腎臟小管間質(zhì)的纖維化對于有效地延緩CKD的進展有著十分重要的意義。
  近年來,關(guān)于線粒體功能障礙(mitoch

2、ondrial dysfunction,MtD)在CKD疾病進展中的作用得到越來越多的揭示。實驗表明,MtD可以導(dǎo)致氧化應(yīng)激產(chǎn)物(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生增加,加重小管上皮細胞的凋亡。此外,他還能夠通過促進腎小管上皮細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)并且刺激轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor,TGF)β的釋放等

3、途徑加重腎間質(zhì)纖維化。所以,有效地保護線粒體功能對于減輕腎間質(zhì)纖維化延緩CKD進展意義重大。
  人MUTYH基因位于一號常染色體,大小約11.2Kb,其包括16個外顯子,主要編碼兩種MUTYH蛋白:Ⅰ型蛋白質(zhì)作用于線粒體DNA,Ⅱ型蛋白作用于細胞核DNA。MUTYH蛋白通過切除與8氧鳥嘌呤(8-oxoguanine,8-oxoG)錯配的腺嘌呤從而減少氧化應(yīng)激導(dǎo)致的DNA G:C向A:T的突變,進而維持基因的穩(wěn)定性。MUTYH基因

4、功能的缺失和異??梢詫?dǎo)致多種腫瘤以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病的產(chǎn)生,然而目前關(guān)于其在線粒體功能及腎間質(zhì)纖維化中的作用尚不明了。
  線粒體與中醫(yī)學(xué)里的“氣”在某些方面具備共通性:功能上,線粒體產(chǎn)生能量用以供應(yīng)人體生命活動及維持人體體溫,而氣則能夠起到推動及溫煦的作用;病理變化上,線粒體病變可導(dǎo)致人體多個系統(tǒng)如腎臟、心臟、神經(jīng)的病變,氣的虛損及氣機失調(diào)亦可引發(fā)多個臟腑器官的疾病。一些實驗研究也證實,具備溫陽作用的中醫(yī)藥如鎖陽、姜黃等能夠起到保護

5、線粒體功能的作用。然而,作為溫下劑代表方的大黃附子湯,其是否具有保護線粒體功能延緩腎臟間質(zhì)纖維化的作用尚未見研究報道。
  我們設(shè)想MUTYH能夠通過減少氧化應(yīng)激導(dǎo)致的DNA突變損傷,保護線粒體功能從而減輕腎間質(zhì)纖維化延緩CKD的進展,大黃附子湯能夠通過保護線粒體功能減輕腎間質(zhì)纖維化從而保護腎臟。
  第一部分 MUTYH基因的敲除加重小鼠UUO模型的間質(zhì)纖維化及線粒體功能障礙
  目的:在小鼠UUO模型中觀察MUTY

6、H基因敲除對于腎間質(zhì)纖維化及線粒體功能的影響
  方法:分別利用C57BL/6背景的野生型小鼠和MUTYH基因敲除型小鼠建立單側(cè)輸尿管梗阻性(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型,各自分為對照組、UUO3d、UUO10d三組。模型建立成功后處死小鼠收割小鼠腎臟,利用Masson染色觀察小鼠腎間質(zhì)纖維化程度,qRT-PCR檢測野生型小鼠UUO模型中MUTYH基因表達的變化,Westem blo

7、tting和qRT-PCR檢測纖維化指標α-SMA、TGF-β、collagenⅠ和collagenⅢ的表達差異,qRT-PCR檢測炎癥指標白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、細胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)以及單核細胞趨化蛋白1(monocyte chemoattracta

8、nt protein1,MCP-1)的表達,同時檢測線粒體功能障礙指標線粒體DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷貝數(shù)、線粒體膜電位(mitochondrial membrance potential,MMP)及氧化應(yīng)激產(chǎn)物(reactive oxygenspecies,ROS)的變化。
  結(jié)果:(1)在野生型小鼠UUO模型中,MUTYH基因的表達隨著梗阻時間的延長而增高。(2) Masson染色顯示,與對照

9、組比較,UUO模型腎臟細胞外基質(zhì)沉積顯著增多,Western blotting和qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)α-SMA、TGF-β、collagenⅠ和collagenⅢ的表達增高,qRT-PCR檢測結(jié)果顯示炎癥因子釋放增多。與野生型UUO模型相比,MUTYH基因敲除使得細胞外基質(zhì)沉積增多,α-SMA、TGF-β、collagenⅠ和collagenⅢ的表達增高及炎癥因子的釋放更為明顯。(3)相較于對照組,UUO模型中mtDNA的拷貝數(shù)、MM

10、P下降,ROS的產(chǎn)生增多,提示UUO模型中存在線粒體功能障礙,這一現(xiàn)象在MUTYH基因敲除的UUO模型中更為嚴重。
  結(jié)論:MUTYH基因的敲除加重了UUO模型的腎間質(zhì)纖維化及線粒體功能障礙。
  第二部分過表達MUTYH減輕TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細胞纖維化及線粒體功能障礙
  目的:觀察過表達MUTYH對于TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細胞纖維化及線粒體功能障礙的作用
  方法:利用永生的人腎臟(human

11、kidney,HK-2)近端腎小管細胞進行培養(yǎng),分為對照組,5ng/ml的TGF-β1刺激組,TGF-β1刺激加h-mutyh過表達組。Westernblotting和qRT-PCR觀察TGF-β1分別刺激細胞24h、48h后MUTYH的表達,Western blotting和qRT-PCR檢測纖維化指標α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表達,Elisa試劑盒檢測8-oxoG的水平,同時觀察線粒體功能障礙指標mtDNA

12、拷貝數(shù)、MMP和ROS的變化。
  結(jié)果:(1)加入TGF-β1刺激后,qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)MUTYH基因的表達隨著刺激時間的延長而增多,Western blotting結(jié)果發(fā)現(xiàn)MUTYH編碼的Ⅰ型線粒體蛋白(~57kDa)表達減少,而Ⅱ型核蛋白(~53kDa)的表達增多。(2)給予TGF-β1刺激后細胞纖維化指標α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表達較對照組增多,8-oxoG的水平增高,過表達h-mutyh可

13、以抑制TGF-β1誘導(dǎo)產(chǎn)生的上述現(xiàn)象。(3)與對照組相比,TGF-β1刺激的HK-2細胞mtDNA拷貝數(shù)、MMP下降、ROS產(chǎn)生增多,提示TGF-β1刺激可導(dǎo)致HK-2細胞線粒體功能受損,而過表達h-mutyh可使得mtDNA拷貝數(shù)、MMP下降的程度減輕,ROS的產(chǎn)生減少。
  結(jié)論:過表達MUTYH減輕TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2細胞纖維化及線粒體功能障礙。關(guān)鍵詞:MUTYH;HK-2細胞;纖維化;線粒體功能障礙
  第三部

14、分大黃附子湯減輕慢性馬兜鈴酸腎病的間質(zhì)纖維化及線粒體功能障礙
  目的:觀察大黃附子湯能否可以減輕慢性馬兜鈴酸腎病(aristolochic acidsnephropathy,AAN)的間質(zhì)纖維化及馬兜鈴酸誘導(dǎo)的線粒體功能障礙
  方法:雄性的C57BL/6小鼠隨機分為六組:對照組、模型組、生理鹽水治療組,常規(guī)劑量大黃附子湯組、高劑量大黃附子湯組和羅格列酮治療組,對照組小鼠給予每三天腹腔注射生理鹽水,模型組給予連續(xù)8周每三天

15、給予腹腔注射3mg/kg的馬兜鈴酸Ⅰ(Aristolochic acidsⅠ,AAⅠ),4周后常規(guī)劑量組給予2.5mg/kg/d的大黃附子湯灌胃,而高劑量組給予5mg/kg/d的大黃附子湯灌胃治療,羅格列酮組給予5mg/kg/d的羅格列酮灌胃治療。實驗結(jié)束時,收集小鼠24h尿液及血液標本,留取腎臟。檢測小鼠一般指標如腎重、腎重/體重指數(shù),腎功能指標如24h尿蛋白(24h urinary protein,24hUpro)、尿素氮(bloo

16、d urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)的變化,Masson染色觀察腎間質(zhì)纖維化程度,Westem blotting檢測腎間質(zhì)纖維化指標collagenⅠ和collagenⅢ的表達,同時觀察線粒體功能指標mtDNA拷貝數(shù)、MMP、ATP和ROS的變化。
  結(jié)果:(1)與對照組比較,模型組小鼠的腎重、腎重/體重指數(shù)下降,24hUpro、BUN、Scr水平升高,給予常規(guī)劑量大黃附

17、子湯治療后上述指標改善不明顯,而給予高劑量大黃附子湯及羅格列酮治療的小鼠上述指標改善明顯。(2) Masson染色顯示,模型組腎間質(zhì)纖維化程度較對照組嚴重,細胞外基質(zhì)沉積顯著增多,Western blotting也證實collagenⅠ、collagenⅢ的表達增高,高劑量大黃附子湯及羅格列酮治療能夠減輕細胞外基質(zhì)沉積,降低collagenⅠ、collagenⅢ的高表達。(3)相較于對照組,模型組mtDNA、MMP、ATP下降程度明顯,

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