MDM2在腎小管間質(zhì)纖維化中的作用及機制.pdf

1、目的：通過小鼠單側(cè)輸尿管梗阻模型探討MDM2在腎小管間質(zhì)纖維化（tubulointerstitial fibrosis，TIF）進程中的作用及機制。
　　方法：
　　（1）在動物實驗和細胞實驗中檢測MDM2在腎小管間質(zhì)纖維化中的表達情況：采取單側(cè)輸尿管結(jié)扎梗阻（unilateral ureter obstruction，UUO）構(gòu)建TIF模型，造模7天后取腎組織標(biāo)本。用免疫組化方法檢測假手術(shù)組和UUO組α-SMA、FN的表達

2、部位和表達量，用Masson染色檢測纖維化區(qū)域所占比例以證實造模成功。通過Western Blot和免疫組化檢測假手術(shù)組和UUO組MDM2蛋白表達情況以觀察MDM2蛋白在TIF時的在體表達情況。通過Western Blot檢測腎成纖維細胞和腎小管上皮細胞在對照組和TGF-β1刺激后12h、24h、48h時MDM2蛋白表達情況以觀察MDM2蛋白在TIF時的離體表達情況。
　?。?）在動物實驗中探討阻斷MDM2-p53通路對TIF的影

3、響：將小鼠分為4組（n=5）：假手術(shù)+空白溶劑組、假手術(shù)+nutlin-3干預(yù)組、UUO手術(shù)+空白溶劑組、UUO手術(shù)+nutli n-3干預(yù)組。干預(yù)組選擇造模前1天作為起始時間點，采用nutli n-3腹腔注射以抑制MDM2作用，每日腹腔注射2次，連續(xù)注射7天?？瞻兹軇┙M采用同等體積的DMSO按與干預(yù)組相同的時間點、時長和頻次進行腹腔注射。7天注射結(jié)束后第2天處死小鼠并取腎組織標(biāo)本。用Western Blot檢測4組小鼠MDM2表達量以

4、及用Western Blot及免疫組化檢測4組小鼠p53表達量以確定nutlin-3發(fā)揮作用。用Western Blot和免疫組化檢測α-SMA以及用免疫組化檢測FN的表達以了解MDM2-p53通路被阻斷后對TIF的影響，用Masson染色再次評估阻斷MDM2-p53通路對TIF的影響。
　?。?）初步探索Notch1在TIF中的作用：用Western Blot和免疫組化檢測假手術(shù)組和UUO組小鼠腎組織中Notc h1的表達。

5、r>　　結(jié)果：
　　(1)通過Masson染色和免疫組化檢測α-SMA、FN的表達證實了UUO模型造模成功；在UUO模型小鼠腎臟和TGF-β1刺激的NRK-49F細胞以及NRK-52E細胞中MDM2表達上調(diào)；
　　(2)用nutlin-3阻斷MDM2-p53通路使得p53表達水平上調(diào)，但對小鼠腎臟MDM2的表達無明顯影響；阻斷MDM2-p53通路對UUO模型中α-SMA、FN的表達及腎臟纖維化程度無明顯影響；
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