依維莫司通過(guò)上調(diào)TET1蛋白抑制心肌纖維化的研究.pdf

1、背景：
　　心肌梗死目前已經(jīng)成為威脅整個(gè)人類健康的最重要的疾病之一，嚴(yán)重影響患者的壽命和生存質(zhì)量。心肌纖維化(Myocardial Fibrosis,MF)是心肌梗死后的一個(gè)很重要的病理特點(diǎn)，且對(duì)疾病的預(yù)后有著很大的影響。目前對(duì)于心肌梗死的治療方法比較有限，且只能暫時(shí)緩解疾病癥狀，而不能從根本上緩解甚至逆轉(zhuǎn)心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展。因此，研究緩解心肌纖維化的方法有著很重要的意義。
　　依維莫司是一種抗腫瘤、抗血管增殖的藥物，在多

2、種生物學(xué)過(guò)程中起著重要作用。而研究發(fā)現(xiàn)依維莫司還具有抗成纖維細(xì)胞增殖的作用。而依維莫司是否具有抗心肌纖維化的作用，還尚不清楚。
　　TET蛋白是一種去甲基化酶，能將5-甲基胞嘧啶轉(zhuǎn)化為5-羥甲基胞嘧啶，從而調(diào)節(jié)基因的甲基化水平，促進(jìn)基因表達(dá)。既往研究表明TET蛋白在維持胚胎干細(xì)胞多能性和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。而最近有研究發(fā)現(xiàn)，TET蛋白也參與抗心肌纖維化過(guò)程，對(duì)緩解器官纖維化的發(fā)展起著重要作用。
　　目的：

3、　　建立C57BL/6小鼠心肌梗死模型，并對(duì)心梗后小鼠進(jìn)行依維莫司抗纖維化治療，觀察小鼠心梗術(shù)后心肌的病理學(xué)變化。通過(guò)檢測(cè)小鼠心肌組織中TET蛋白的mRNA水平，發(fā)現(xiàn)TET1的mRNA表達(dá)水平具一定的趨勢(shì)，遂運(yùn)用Western blot從蛋白水平進(jìn)一步驗(yàn)證。從而初步探討依維莫司在心肌纖維化過(guò)程中發(fā)揮的作用，以及依維莫司是否通過(guò)激活TET1蛋白發(fā)揮抗心肌纖維化的作用。
　　方法：
　　將心肌梗死術(shù)后存活的24只C57BL/6成

4、年小鼠隨機(jī)分為心肌梗死組、心肌梗死+依維莫司組、正常組各12只。干預(yù)組以依維莫司3mg/kg/d灌胃。分別于術(shù)后3d、1w、2w取出心肌組織保存于液氮或做脫水處理，做HE染色、Masson染色觀察心肌膠原增生的情況，用熒光定量 PCR方法檢測(cè)小鼠心肌梗死后的梗死周邊區(qū)TET1、TET2、TET3及ColⅠ（CollagenⅠ）和ColⅢ（CollagenⅢ）的mRNA水平，發(fā)現(xiàn)TET1的mRNA表達(dá)最具趨勢(shì)，再運(yùn)用Western blo

5、t檢測(cè)TET1的蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　1.HE染色和Masson染色顯示心肌梗死術(shù)后，小鼠心臟梗死及周邊區(qū)有大量膠原沉積。而干預(yù)組的心肌組織膠原含量較心梗組明顯減輕。
　　2.依維莫司干預(yù)后，小鼠心肌TET1 mRNA水平明顯上調(diào)，而對(duì)TET2和TET3沒(méi)有影響。之后的western blot檢測(cè)也驗(yàn)證了這一變化。
　　結(jié)論：
　　根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出，依維莫司具有抗心肌纖維化的作用，且依維莫司