雷帕霉素阻斷mTOR信號通路抑制病毒性心肌炎心肌纖維化的實驗研究.pdf

1、目的:哺乳類雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路在細胞的生存、生長與增殖中起中心調控作用，本研究用柯薩奇病毒B3m株(CVB3m,CVB3)感染體外培養(yǎng)的SD大鼠心肌成纖維細胞和心肌細胞，建立病毒性心肌炎(VM)的細胞模型，用雷帕霉素(rapamycin)阻斷mTOR信號通路，了解mTOR信號通路在VM心肌纖維化的可能作用機制。 方法:取新生SD鼠，用改良法原代培養(yǎng)心肌成纖維細胞和心肌細胞，根據細胞形態(tài)和免疫細胞化學染色對細胞進行

2、鑒定，建立CVB3感染的細胞模型。用mTOR抑制劑——雷帕霉素對細胞模型進行干預，采用RT-PCR、Western Blot、免疫細胞化學染色等方法檢測細胞mTOR、eIF-4E、Ⅰ型膠原及Smad3表達，應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件對數據進行統(tǒng)計學分析，P<0.05為差別有顯著性統(tǒng)計學意義。 結論: (1)低濃度的胰蛋白酶和膠原酶合用，結合2次差速貼壁分離培養(yǎng)大鼠心肌細胞，可提高心肌細胞的存活率和純度，使細胞搏動良好。

3、 (2)心肌成纖維細胞可作為CVB3的感染細胞建立VM細胞模型。 (3)雷帕霉素使心肌成纖維細胞內源性mTOR表達下調，在一定劑量內，呈劑量和時間依賴性，mTOR可作為雷帕霉素作用的靶點。 (4)雷帕霉素抑制CVB3誘導的心肌細胞成纖維細胞增殖是通過mTOR/eIF-4E信號通路起作用的。 (5)雷帕霉素抑制CVB3可誘導心肌成纖維細胞Ⅰ型膠原及Smad3表達，提示mTOR/eIF-4E信號通路與Smad