MIR-183靶向TEX15調(diào)控精子發(fā)生.pdf

1、目前，不孕不育困擾著10-15％的育齡夫婦。其中因為男性因素引起的不育比例約占一半，并且呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢。男性不育的已知原因有生殖道梗阻或物理性阻塞、免疫性因素、生殖系統(tǒng)炎癥及性功能障礙等，但找不到病因的患者的比例有60%～75%之多，稱為特發(fā)性男性不育，表現(xiàn)為無精子癥或少弱精癥。約10-15%的非梗阻性無精子癥(non-obstructive azoospermia，NOA)與染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常和/或Y染色體微缺失相關(guān)，但大部分N

2、OA患者精子產(chǎn)生缺陷或異常的原因或途徑還不清楚。雖然隨著助孕技術(shù)如單精子卵胞漿內(nèi)注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)發(fā)展，為這些不育患者提供了生育的可能，但ICSI繞過精子受精過程中的自然選擇機制有傳遞遺傳缺陷給下一代的危險。由此可知，了解精子發(fā)生障礙的分子機制和遺傳學基礎(chǔ)對闡明特發(fā)性男性不育的發(fā)病機制有著重要的意義。
　　精子發(fā)生是一個非常復雜的過程，可以分為三個階段：精原細胞有絲分

3、裂進行細胞增殖；精母細胞進行減數(shù)分裂；單倍體精子細胞分化。基因轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡(luò)嚴密地調(diào)控著精子發(fā)生中的每個過程。尤其是在精子發(fā)生的減數(shù)分裂階段，轉(zhuǎn)錄活性增加，mRNA翻譯被抑制，此階段主要是通過轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控機制來抑制mRNA的翻譯，microRNA(miRNA)就參與其中。睪丸特異性蛋白15（Testis-experessed15， TEX15）與減數(shù)分裂過程密切相關(guān)，小鼠敲除模型表現(xiàn)為睪丸性不育。因此TEX15很可能在NOA患者精子發(fā)生障礙的

4、發(fā)生中發(fā)揮重要作用，但目前關(guān)于TEX15轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的具體機制未知。本研究發(fā)現(xiàn)TEX15的 mRNA在NOA患者中的表達量明顯低于精子正常發(fā)生對照組。免疫組化結(jié)果也證實了NOA患者睪丸精原細胞中TEX15蛋白表達量顯著下調(diào)。我們應用靶基因預測網(wǎng)站預測發(fā)現(xiàn)miR-183可能靶向TEX15，通過熒光素酶報告基因?qū)嶒灧治鲎C實miR-183對TEX15 mRNA3?UTR結(jié)合位點的靶向性。進一步，我們在U2OS細胞系中抑制miR-183后發(fā)

5、現(xiàn)TEX15 mRNA的水平顯著升高。同時，在NOA患者睪丸組織中miR-183水平與對照組相比明顯上升，與TEX15表達呈顯著負相關(guān)性。并且檢測小鼠不同睪丸發(fā)育階段（8d，14d，16d，18d，25d，2m）中TEX15與miR-183含量的表達，發(fā)現(xiàn)兩者呈顯著負相關(guān)性。本研究通過實驗證明了miR-183通過直接靶向調(diào)控TEX153?UTR區(qū)域，下調(diào)了TEX15轉(zhuǎn)錄后的水平，而TEX15水平的下調(diào)，可能直接導致減數(shù)分裂過程中染色體異