LncRNA-AV310809通過(guò)調(diào)控Wnt2-βcatenin信號(hào)通路促進(jìn)TGF-β1誘導(dǎo)的腹膜間皮細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過(guò)程.pdf

1、目的：
　　通過(guò)前期lncRNA基因芯片篩選，我們尋找到了與腹膜纖維化相關(guān)的關(guān)鍵性長(zhǎng)鏈非編碼 RNA（lncRNA-AV310809），共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測(cè)其可能通過(guò)纖維化信號(hào)通路（Wnt2/β-catenin信號(hào)通路）發(fā)揮作用。本研究旨在進(jìn)一步通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討該關(guān)鍵性lncRNA在腹膜纖維化過(guò)程中的作用及具體調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1、體外培養(yǎng)腹膜間皮細(xì)胞系（HMrSV5），運(yùn)用濃度為7ng/ml的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（T

2、GF-β1）刺激細(xì)胞48h，建立腹膜間皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）模型。運(yùn)用Western blot檢測(cè)纖維連接蛋白（FN）、I型膠原蛋白（COL-I）、E鈣黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)變化；運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證 lncRNA-AV310809表達(dá)水平的改變；通過(guò) Western blot觀察 TGF-β1對(duì)Wnt2/β-catenin信號(hào)通路的影響。2、運(yùn)用TGF-β1刺激已轉(zhuǎn)染lncRNA-AV

3、310809過(guò)表達(dá)質(zhì)粒或陰性對(duì)照質(zhì)粒的HMrSV5細(xì)胞。用光鏡觀察HMrSV5細(xì)胞形態(tài)的變化；Western blot及免疫熒光檢測(cè)FN、COL-I、E-cadherin、α-SMA蛋白表達(dá)變化以及對(duì)Wnt2/β-catenin信號(hào)通路的影響。3、運(yùn)用MTT及劃痕損傷實(shí)驗(yàn)觀察lncRNA-AV310809對(duì)HMrSV5細(xì)胞增殖及遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1、TGF-β1可誘導(dǎo)HMrSV5細(xì)胞EMT發(fā)生，即上皮表型E-ca

4、dherin蛋白表達(dá)水平降低，而間質(zhì)表型FN、COL-I及α-SMA蛋白表達(dá)水平升高；2、TGF-β1在誘導(dǎo)HMrSV5細(xì)胞發(fā)生EMT的同時(shí)上調(diào)了lncRNA-AV310809的表達(dá)水平（差異倍數(shù)1.30倍，P=0.02）；3、TGF-β1在誘導(dǎo)HMrSV5細(xì)胞發(fā)生EMT的過(guò)程中Wnt2/β-catenin信號(hào)通路被活化（Wnt2、β-catenin蛋白表達(dá)增加）；4、過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809可能通過(guò) Wnt2/β-cate

5、nin信號(hào)通路作用于 TGF-β1誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞 EMT發(fā)生:○1過(guò)表達(dá) lncRNA-AV310809促進(jìn)了 TGF-β1誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞梭形樣形態(tài)改變；○2過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809促進(jìn)了TGF-β1誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞E-cadherin蛋白表達(dá)減少，而FN、COL-I及α-SMA蛋白表達(dá)增加；○3過(guò)表達(dá)lncRNA-AV310809促進(jìn)了TGF-β1誘導(dǎo)的HMrSV5細(xì)胞Wnt2、β-catenin蛋白