GPR50通過調控Notch和Wnt-β-catenin信號通路促進神經前體細胞的自我更新與神經元分化.pdf

1、目的：在中樞神經系統(tǒng)，神經前體細胞是一種多潛能細胞，他能夠自我更新，同時也能分化形成神經元、星型膠質細胞、少突膠質細胞。神經前體細胞增殖、分化、遷移并最終形成神經網絡。上述任何一個過程的異常都會引起大腦的機能紊亂，并導致一些神經系統(tǒng)的疾病，如精神分裂癥、自閉癥和阿爾茨海默癥。最近的研究表明，在嚴重的抑郁癥和雙極情感障礙的患者中，神經前體細胞的增殖和分化出現異常，這表明，神經前體細胞在抑郁癥和雙極情感障礙患者的致病機理中發(fā)揮一定的作用。<

2、br>　　G蛋白偶聯(lián)受體50(GPR50)，亦叫褪黑激素相關受體或ML1X，是位于X染色體上的G蛋白偶聯(lián)受體。有研究表明，GPR50是重度抑郁癥和雙極情感障礙的一個風險基因。有研究也表明，抑郁癥和雙極情感障礙可能與大腦皮層的發(fā)育異常相關，在成年哺乳動物的腦垂體、下丘腦、海馬中，GPR50有表達。此外，GPR50在胚胎13天的小鼠大腦中開始表達，在胚胎18天時表達量達到最高峰。這一系列的證據表明，GPR50在大腦的發(fā)育中可能起著很重要的作

3、用。但是，關于GPR50在大腦中的功能和機制仍不清楚，所以我們主要探索GPR50對神經前體細胞的自我更新及分化的影響和分子機制。
　　方法：我們利用免疫熒光染色的方法，檢測GPR50在分離的神經前體細胞和胚胎14天的小鼠大腦VZ區(qū)神經前體細胞上的表達。分離胚胎發(fā)育14天的小鼠側腦室室管膜下區(qū)的神經前體細胞，用含B27、EGF、bFGF的DMEM/F12的培養(yǎng)液培養(yǎng)3-4天，用細胞核電穿孔技術轉染GPR50的siRNA，每個電轉杯轉

4、染siRNA200nM，然后將細胞按每孔500個細胞的密度種于96孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)8天，檢測形成的神經球數目，按2x104的密度在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)8天檢測形成神經球的大小。用含B27和0.5％的胎牛血清的DMEM/F12分化培養(yǎng)液培養(yǎng)5天，然后分析神經前體細胞分化為星型膠質細胞的情況。在分子機制方面，通過實時定量PCR（q-PCR）和熒光素酶報告基因的方法，在轉錄水平上檢測與神經前體細胞增殖和分化相關的一些基因的表達。
　　結

5、果：
　　1）GPR50在VZ區(qū)和離體培養(yǎng)的神經前體細胞上表達。
　　2）用siRNA干擾GPR50后，神經前體細胞的自我更新能力減弱。
　　3）用siRNA干擾GPR50后，對星型膠質細胞的分化沒有影響。
　　4）用siRNA干擾GPR50后，Hes1的表達水平升高，而TCF7L2，Ngn1，Ngn2和cyclin D1的表達水平降低。
　　結論：GPR50在VZ區(qū)和離體培養(yǎng)的神經前體細胞上表達。GPR5