GPR50促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化的研究.pdf

1、目的：有文獻(xiàn)報(bào)道哺乳動(dòng)物端腦的發(fā)育和神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化有關(guān)。這種增殖和分化的過程受到嚴(yán)格的時(shí)間和信號(hào)通路的調(diào)控必須非常準(zhǔn)確，神經(jīng)前體細(xì)胞能夠增殖產(chǎn)生新的神經(jīng)前體細(xì)胞，從而維持神經(jīng)前體細(xì)胞的數(shù)目。同時(shí)，神經(jīng)前體細(xì)胞又能分化成不同的細(xì)胞，可以分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)前體細(xì)胞的這種增殖和分化受到一系列的信號(hào)通路和蛋白分子的共同調(diào)節(jié)，如果此過程發(fā)生紊亂的會(huì)造成一系列神經(jīng)系統(tǒng)疾病，神經(jīng)前體細(xì)胞的分化和增殖的過程為神經(jīng)系

2、統(tǒng)疾病的治療提供了一定的基礎(chǔ)。許多基因都和神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化有關(guān)。有報(bào)道證明GPR50和雙情感障礙、抑郁癥以及精神分裂癥神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，我們就想既然GPR50也和一些神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，那么GPR50對(duì)于神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化是否有一定的作用。因此，我們的研究主要定位在GPR50對(duì)于神經(jīng)前體細(xì)胞增殖和分化的研究。
　　方法：為研究GPR50在神經(jīng)前體細(xì)胞中的表達(dá)，分別從三個(gè)方面進(jìn)行了檢測(cè)， GPR50在離體培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)

3、胞中的表達(dá)、GPR50在胎鼠腦組織側(cè)腦室的神經(jīng)前體細(xì)胞中的表達(dá)以及離體培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞和胎鼠腦組織的GPR50的RNA的表達(dá)。為了研究GPR50對(duì)體外培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖和分化的作用。我們用離體培養(yǎng)的神經(jīng)前體細(xì)胞，神經(jīng)球培養(yǎng)在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，分化的神經(jīng)前體細(xì)胞培養(yǎng)在分化的培養(yǎng)基中。檢測(cè)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖是在電轉(zhuǎn)對(duì)應(yīng)的質(zhì)粒或者siRNA后，神經(jīng)前體細(xì)胞電轉(zhuǎn)培養(yǎng)三天后，在細(xì)胞固定前三小時(shí)，換為加有Brdu的新的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分別

4、染色Brdu和DAPI。分化的細(xì)胞體外分化三到四天后，分別染色TUJ1和DAPI。體內(nèi)子宮內(nèi)電穿孔實(shí)驗(yàn)，此實(shí)驗(yàn)是注射8微克2微升的空載質(zhì)粒和 GPR50的質(zhì)粒到胚胎期14.5天的胎鼠的側(cè)腦室，等胎鼠到胚胎期17.5天時(shí)取腦袋。進(jìn)一步分析，分別染色不同的抗體Brdu、TUJ1、Tbr1、Cux1、Sox5進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：GPR50在側(cè)腦室神經(jīng)前體細(xì)胞中有表達(dá)，在轉(zhuǎn)染GPR50 siRNA和對(duì)照組后Brdu陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目是減少的，

5、同樣電轉(zhuǎn)GPR50的質(zhì)粒相對(duì)于空載體時(shí)，Brdu陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目是增加的。神經(jīng)元陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目是減少的在電轉(zhuǎn)siRNA后，對(duì)應(yīng)的過表達(dá)GPR50后神經(jīng)元陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目是增加的。同時(shí)，皮層不同層的神經(jīng)元中，Tbr1和Sox5的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目在電轉(zhuǎn)GPR50后是增加的，而Ctip2和Cux1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目是沒有變化的在電轉(zhuǎn)GPR50后。
　　結(jié)論：總之，GPR50雖然促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖，但對(duì)于側(cè)腦室的神經(jīng)前體細(xì)胞的總數(shù)目沒有影響，所以可能促進(jìn)