胸腺素β4促進肝前體細胞分化為肝細胞的體外研究.pdf

1、目的：
　　探索胸腺素β4（Tβ4）對肝前體細胞（WB-F344細胞）增殖及分化的影響，研究Tβ4誘導分化細胞的功能，為Tβ4在促進肝前體細胞分化，促進肝再生方面提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.用含不同濃度Tβ4的等量培養(yǎng)液體外培養(yǎng)WB-F344細胞，培養(yǎng)液中Tβ4濃度分別為1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1μg/ml，相應命名為1ng/ml組、10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組，

2、以無Tβ4培養(yǎng)液培養(yǎng)的細胞為空白對照組。在加入處理因素培養(yǎng)細胞1天、2天及3天后，采用CCK-8方法檢測各組Tβ4對F344細胞增殖的影響，同時觀察Tβ4對WB-F344細胞形態(tài)的影響。
　　2.選擇對WB-F344細胞增殖影響有統(tǒng)計學意義的組（10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組），同時設(shè)立空白對照組，采用qRT-PCR方法檢測肝細胞標志物（白蛋白）、肝干細胞標志物（甲胎蛋白）及膽管細胞標志物(細胞角蛋白-19)

3、基因的表達，采用Western blot方法檢測白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)及細胞角蛋白-19(CK-19)蛋白的表達，確定Tβ4可誘導WB-F344細胞分化為何種細胞。在加入處理因素5天后，觀察Tβ4誘導細胞的糖原合成功能，吲哚靛青綠攝取情況，研究Tβ4誘導細胞可發(fā)揮的功能。
　　結(jié)果：
　　1.細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn):加入處理因素1天及2天后，實驗組細胞增殖與對照組相比無明顯差異，而在加入處理因素3天后，10ng/ml

4、組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比，細胞增殖速度減緩(P＜0.05)。同時，Tβ4誘導培養(yǎng)細胞的細胞核由肝前體細胞的單核細胞向肝細胞樣細胞的雙核或多核細胞轉(zhuǎn)變。
　　2.在加入處理因素后3天后，qRT-PCR結(jié)果顯示:100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比，ALB基因表達量明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05），Western blot結(jié)果顯示:10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較

5、對照組相比，CK-19蛋白表達量下降，差異有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。在加入處理因素5天后，Western blot結(jié)果顯示:10ng/ml組、100ng/ml組、1μg/ml組較對照組相比，AFP蛋白表達量下降（P均＜0.05），在100ng/ml組、1μ/ml組較對照組相比，ALB蛋白表達量增加（P均＜0.05），呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。
　　3.在細胞功能方面:在加入處理因素后5天后，糖原染色結(jié)果及ICG攝取實驗結(jié)果顯示T