誘導(dǎo)干細(xì)胞分化為肝系細(xì)胞的體外研究.pdf

1、本研究旨在進(jìn)一步探索ESC和骨髓MSC分化為肝細(xì)胞的體外誘導(dǎo)/篩選體系,并觀察其形態(tài)學(xué)變化,標(biāo)記性蛋白和肝細(xì)胞功能的表達(dá).第2章胚胎干細(xì)胞定向分化為肝系細(xì)胞的體外研究目的:研究不同分化誘導(dǎo)體系對(duì)ESC定向分化為肝細(xì)胞的作用.方法:小鼠ESC懸浮培養(yǎng)5-7d發(fā)育成擬胚體,在自主分化、肝細(xì)胞生長因子(HGF)誘導(dǎo)或5﹪大鼠淤膽血清+HGF誘導(dǎo)體系中分化.觀察分化細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,內(nèi)胚層或肝膽抗原(AFP、ALB、CK18和CK19)表達(dá),并

2、比較不同分化細(xì)胞的糖原、白蛋白、甘油三酯及尿素氮的合成,以及細(xì)胞吲哚氰綠(ICG)和熒光二乙酯(FDA)染色情況.結(jié)論:ESC體外自主分化中止于早期內(nèi)胚層.HGF誘導(dǎo)ESC定向分化為肝系細(xì)胞的效力有限,并促進(jìn)其向中胚層分化.引入淤膽血清的誘導(dǎo)體系可以抑制ESC向其它胚層分化,高度定向誘導(dǎo)/篩選ESC分化為肝系細(xì)胞.第3章骨髓間質(zhì)干細(xì)胞橫向分化為肝系細(xì)胞的體外研究目的:研究不同的體外分化誘導(dǎo)體系對(duì)骨髓MSC橫向分化為肝細(xì)胞的作用.方法:經(jīng)

3、擴(kuò)增4-6代的SD大鼠骨髓MSC分別在自主分化、HGF或5﹪大鼠淤膽血清+HGF誘導(dǎo)系統(tǒng)中培養(yǎng).觀察MSC在不同分化系統(tǒng)中的分化情況,檢測(cè)細(xì)胞抗原AFP、ALB、CK18和CK19表達(dá),分化細(xì)胞的葡萄糖、蛋白質(zhì)(白蛋白)、甘油三酯、尿素氮的合成功能,細(xì)胞ICG和FDA染色,安定轉(zhuǎn)化.同時(shí)檢測(cè)1-14d不同時(shí)間點(diǎn)淤膽血清+HGF體系誘導(dǎo)細(xì)胞肝特異蛋白mRNA的表達(dá)情況(RT-PCR).結(jié)論:骨髓MSC自主分化為骨髓間質(zhì)細(xì)胞.HGF促進(jìn)MS