損傷肝臟條件培養(yǎng)液體外誘導小鼠骨髓細胞分化為肝細胞的研究.pdf

1、目的：探討小鼠骨髓單個核細胞(bonemarrowmononuclearcells，BMMNCs)在體外誘導分化為肝細胞的可行性及其方法。 方法：將CCl4肝損傷小鼠的肝臟進行培養(yǎng)，收集上清，添加到培養(yǎng)液中誘導BMMNCs分化。倒置顯微鏡連續(xù)觀察細胞分化過程的形態(tài)學變化。培養(yǎng)1,7，14，21天時，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測各組細胞甲胎蛋白(AFP)、細胞角蛋白18(CK18)、細胞角蛋白19(CK19)、肝細胞核因

2、子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基轉(zhuǎn)移酶(rAT)和白蛋白(ALB)基因的表達，免疫熒光反應檢測AFP、CK18、CK19、ALB蛋白水平的表達；高碘酸—希夫反應(PAS反應)檢測細胞糖原合成。 結(jié)果：誘導組細胞出現(xiàn)肝細胞樣形態(tài)變化；培養(yǎng)第7天出現(xiàn)AFP、CK19基因表達，其中AFP第14天表達增強，第21天表達減弱；第14天開始出現(xiàn)ALB、CK18、HNF3β基因表達，而后持續(xù)表達到21天；第21天出現(xiàn)TAT表達。免疫熒光反應表