小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液活性成分對(duì)骨髓MSC體外增殖的影響.pdf

1、干細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控是當(dāng)前生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)重要方向。成功利用干細(xì)胞需要闡明干細(xì)胞增殖和分化的調(diào)控機(jī)制，以對(duì)它們進(jìn)行有效的體外操作和體內(nèi)干預(yù)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是一類成體多能干細(xì)胞。骨髓微環(huán)境通過多種方式調(diào)控造血譜系和非造血譜系細(xì)胞的生物學(xué)行為。骨髓內(nèi)皮細(xì)胞是參與組成骨髓微環(huán)境的一種重要的基質(zhì)細(xì)胞，它們與MSC在骨髓組織發(fā)育中和組織定位上有著密切的關(guān)系，所分泌的多種細(xì)胞因子可能對(duì)骨髓MSC生物學(xué)行為的調(diào)控起著重要作用。目前

2、，關(guān)于骨髓內(nèi)皮細(xì)胞生物活性產(chǎn)物調(diào)控骨髓MSC增殖和分化的研究甚少。 本文的工作旨在利用小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞系，研究其分泌的生物活性因子對(duì)體外培養(yǎng)條件下骨髓MSC增殖的影響，為闡明骨髓內(nèi)皮細(xì)胞在骨髓MSC生長中的調(diào)控作用提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 本研究在鑒定小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞系生物學(xué)特性的基礎(chǔ)上，收集小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞系無血清條件培養(yǎng)液(mBMEC-CM)，使用相對(duì)分子質(zhì)量(RMM)截留值為3000超濾膜對(duì)mBMEC-CM進(jìn)行組分分離，

3、獲得超濾保留組分(稱為RMM>3000組分)和濾出組分(稱為RMM<3000組分)。進(jìn)行原代骨髓MSC集落形成實(shí)驗(yàn)，并通過分離、純化及傳代培養(yǎng)骨髓MSC，在培養(yǎng)體系中加入mBMEC-CM原液及其RMM>3000組分和RMM<3000組分，以MSC集落形成率和MTT比色讀數(shù)為指標(biāo)，觀察了小鼠骨髓MSC譜系細(xì)胞的增殖反應(yīng)。用Western blot檢測(cè)RMM>3000組分中的轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)，以重組小鼠TGF-β1為陽性對(duì)

4、照，結(jié)合抗TGF-β1抗體的使用，進(jìn)行集落形成實(shí)驗(yàn)、MTT比色試驗(yàn)、分裂指數(shù)測(cè)定和細(xì)胞周期分析，進(jìn)一步研究了小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞生物活性產(chǎn)物影響MSC譜系細(xì)胞體外增殖的機(jī)理。本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，mBMEC-CM原液及其RMM>3000組分和RMM<3000組分均能抑制小鼠骨髓原代MSC集落的形成，且RMM>3000組分的抑制作用最為顯著，其最大效應(yīng)濃度為20％(終體積分?jǐn)?shù))；而對(duì)傳代第3代的小鼠骨髓MSC，三者均無顯著影響。在RMM>300

5、0 組分中檢測(cè)到 TGF-β1?？?TGF-β1 抗體能減低RMM>3000 組分對(duì)原代MSC集落形成的抑制作用，使集落生成數(shù)增加。RMM>3000組分能顯著降低原代MSC譜系細(xì)胞的分裂指數(shù)，并使其G<,0>/G<,1>期細(xì)胞比例顯著增加，S+G<,2>/M 期細(xì)胞比例顯著減少，而對(duì)傳代第3代MSC譜系細(xì)胞沒有這些效應(yīng)。 總之，本研究結(jié)果表明，小鼠骨髓內(nèi)皮細(xì)胞能分泌一種以上的生物活性因子，TGF-β1是其中的一種因子，它們對(duì)原