內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液IL-6對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和分泌的影響.pdf

1、目的:探討內(nèi)皮細(xì)胞活化對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖及分泌的的影響及其中機(jī)制。
　　 方法:(1)以不同濃度和不同干預(yù)時(shí)間的TNF-α刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),收集細(xì)胞上清液,用ELISA法測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞IL-6的分泌,TUNEL法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡;(2)HUVEC培養(yǎng)液中分別加入10ng/mlTNF-α或不加入TNF-α24h后,收集上清離心,用0.22um的微孔濾膜過(guò)濾,4℃保存?zhèn)溆?分別為A液和B液;(3)將臍靜脈平滑肌細(xì)

2、胞接種于培養(yǎng)板中分為4組:①刺激組:按1:1比例加入A液和DMEM培養(yǎng)液,②拮抗組:在刺激組基礎(chǔ)上加入抗IL-6單抗,③對(duì)照組:按1:1比例加入B液和DMEM培養(yǎng)液,④空白組:僅加入DMEM培養(yǎng)液。分組后立即采集少量細(xì)胞上清液以ELISA法測(cè)定ICAM-1、IL-8水平。繼續(xù)培養(yǎng)24h后,再次采集上清液測(cè)定ICAM-1和IL-8水平,并收集血管平滑肌細(xì)胞以MTT法檢測(cè)平滑肌細(xì)胞增殖的情況。
　　 結(jié)果:1、TNF-α對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)

3、胞分泌和凋亡的影響:(1)TNF-α濃度和作用時(shí)間對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6的影響:劑量效應(yīng):對(duì)照組:(31.2±2.9)pg/ml、5ng/ml組:(95.4±4.9)pg/ml、10ng/ml組:(122.7±6.3)pg/ml、20ng/ml組:(132.5±7.1)pg/ml、40ng/ml組:(79.1±5.9)pg/ml,時(shí)間效應(yīng):對(duì)照組:(12.4±1.6)pg/ml、6h組:(79.3±5.5)pg/ml、12h組:(9

4、7.5±3.9)pg/ml、24h組:022.7±6.3)pg/ml、48h組:(108.0±4.4)pg/ml;(2)TNF-α對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡指數(shù)測(cè)定:對(duì)照組:(0.029±0.004)、12h組:(0.140±0.005)、24h組:(0.255±0.006)、48h組:(0.329±0.013)。2、內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖和分泌的影響:(1)內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)平滑肌細(xì)胞增殖的影響:四組細(xì)胞的

5、OD值依次為(1.349±0.115)、(1.176±0.093)、(1.012±0.087)和(0.798±0.014),組間比較有顯著性差異(F=2.315,P＜0.05);(2)內(nèi)皮細(xì)胞條件培養(yǎng)液對(duì)平滑肌細(xì)胞分泌的影響:四組細(xì)胞上清液中ICAM-1和IL-8均較基線(xiàn)值有所增加,其中刺激組ICAM-1和IL-8分別較基線(xiàn)升高(0.222±0.044)ng/ml和(2.996±0.059)ng/ml,均高于拮抗劑組、對(duì)照組和空白組(P