大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞SPIO標(biāo)記及檢測(cè).pdf

1、背景：一些研究者利用超順磁性氧化鐵對(duì)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，但是，對(duì)于超順磁性氧化鐵標(biāo)記血管內(nèi)皮祖細(xì)胞后，對(duì)其存活、增殖及凋亡是否有影響研究較少。
　　 目的：研究大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞 (endotheliAlprogenitor cells，EPCS)的分離、培養(yǎng)、SPIO 標(biāo)記，SPIO對(duì)EPCS的標(biāo)記效果及其對(duì)細(xì)胞存活、增殖以及凋亡的影響，為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：SD大鼠體重120g～150g，采用梯

2、度密度離心法和貼壁法獲取大鼠EPCS，采用25μg／mL SPIO對(duì)其標(biāo)記，比較標(biāo)記和未標(biāo)記的EPCS：普魯士藍(lán)染色觀察鐵標(biāo)記率；臺(tái)盼藍(lán)檢測(cè)細(xì)胞活力；MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖活力；Calcein-AM／PI 染色檢測(cè)細(xì)胞活性及細(xì)胞膜完整性；AO／PI 染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果與結(jié)論：分離培養(yǎng)EPCS7～10d，細(xì)胞集落相互連接，呈典型的鋪路石樣外觀。普魯士蘭染色顯示SPIO（25μg/mL，24 h）對(duì)細(xì)胞的標(biāo)記率接近94

3、％；比較SPIO 標(biāo)記及未標(biāo)記的EPCS：細(xì)胞活力分別為94.34％±0.25％和95.33％±0.31％；MTT 法檢測(cè)兩組間相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意學(xué)義(P>0.05)；Calcein-AM/PI 染色檢測(cè)細(xì)胞的活性和膜完整性，存活率分別為96％和97％；AO/PI 染色兩組細(xì)胞的凋亡率均為5％。采用梯度離心法從骨髓中分離單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)可實(shí)現(xiàn)內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)；25μg/mL濃度的SPIO細(xì)胞標(biāo)記率高，對(duì)細(xì)胞毒性小，且不影響EPC