組蛋白乙?；敢种苿┩ㄟ^(guò)阻斷TGF-β1-Smad3通路逆轉(zhuǎn)腹膜間皮細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化.pdf

1、目的：腹膜纖維化是腹膜超濾過(guò)功能衰退和終止腹膜透析的主要原因，而腹膜纖維化是高糖、腹膜炎等因素導(dǎo)致的，而腹膜間皮細(xì)胞（HPMCs）的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化（EMT）被認(rèn)為是腹膜纖維化的重要機(jī)制。表觀遺傳學(xué)是近年來(lái)生物醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)，組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)中重要的修飾方式。最新研究所示，組蛋白乙酰化修飾被證實(shí)與多種組織器官的纖維化過(guò)程有關(guān)，包括肝臟、肺和腎臟等。目前組蛋白乙酰化修飾是否參與腹膜纖維化過(guò)程尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，我們?cè)噲D通過(guò)本研究明確

2、組蛋白乙酰化修飾對(duì)腹膜纖維化的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：以腹膜間皮細(xì)胞為研究對(duì)象，分別采用高糖和組蛋白乙酰化酶抑制劑C646干預(yù)，以CCK-8分析試驗(yàn)檢測(cè)腹膜間皮細(xì)胞增殖活性。采用免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)細(xì)胞鈣粘蛋白（E-cad）、a-肌動(dòng)蛋白(a-SMA)、I型膠原蛋白（Col I）,纖維連接蛋白（FN）、乙酰化的組蛋白H3和H4、TGF-β1和磷酸化-Smad的蛋白質(zhì)表達(dá)；采用比色分析試劑盒分析組蛋

3、白乙酰基移轉(zhuǎn)酶(HAT)活力；實(shí)時(shí)熒光定量試驗(yàn)檢測(cè)HAT亞型p300和GCN5 mRNA的表達(dá)；用CHIP試驗(yàn)和定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(QRT-PCR)評(píng)估各種信號(hào)靶基因水平。
　　結(jié)果：在高糖培養(yǎng)下，腹膜間皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞鈣粘蛋白的顯著減少，a-肌動(dòng)蛋白、I型膠原蛋白和纖維連接蛋白的表達(dá)明顯增加，表明高糖誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生了EMT，同時(shí)，乙酰化H3表達(dá)明顯增高，呈濃度依賴性升高，而乙?；疕4表達(dá)無(wú)明顯變化，組蛋白乙?；妻D(zhuǎn)酶活力明

4、顯升高，HAT亞型p300 mRNA表達(dá)明顯升高。采用C646干預(yù)后，腹膜間皮細(xì)胞EMT被抑制，其乙?；疕3表達(dá)減少，提示H3的乙酰化可能參與腹膜間皮細(xì)胞的 EMT過(guò)程。在高糖培養(yǎng)下，腹膜間皮細(xì)胞TGF-β1和磷酸化的Smad3表達(dá)增多，C646干預(yù)高糖培養(yǎng)下的腹膜間皮細(xì)胞，其TGF-β1和磷酸化的Smad3表達(dá)明顯減少。表明，C646逆轉(zhuǎn)腹膜間皮細(xì)胞的EMT過(guò)程可能通過(guò)抑制TGF-β1和磷酸化的Smad3信號(hào)通路發(fā)揮作用。