HER2在EGFR突變的中晚期肺腺癌中的作用研究.pdf

1、【研究背景】：
　　肺癌不僅是世界范圍最高發(fā)病率的腫瘤，而且是目前死亡率最高的惡性腫瘤。多數(shù)肺癌病人確診時(shí)已為中晚期，雖有手術(shù)及放、化療、靶向等手段，但生存率仍未得到根本改善，肺癌5年存活率仍低于15％。人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2，HER2)基因是重要的癌基因之一，現(xiàn)研究顯示其高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、遷移和血管生成有關(guān)。
　　HER2作為一種重要

2、的致癌因子，已在乳腺癌等腫瘤中被證實(shí)對患者的個(gè)體化治療和預(yù)后具有重要意義，但其在非小細(xì)胞肺癌中的作用目前為止仍不明確。而HER2擴(kuò)增作為EGFR-TKIs獲得性耐藥新機(jī)制對EGFR-TKIs耐藥患者有重要意義。但HER2在EGFR突變和無突變的中晚期肺腺癌中表達(dá)情況如何，是否有差異，是否與EGFR-TKIs耐藥及生存有關(guān)等有待進(jìn)一步研究。因此，我們通過本研究從臨床標(biāo)本及細(xì)胞學(xué)兩方面探索HER-2在EGFR突變的中晚期肺腺癌中的表達(dá)及意義

3、。
　　【研究目的】：
　　本研究以中晚期肺腺癌組織標(biāo)本及肺腺癌細(xì)胞株為主要研究對象，研究HER2在 EGFR突變和無突變的中晚期肺腺癌中表達(dá)情況，差異情況，與EGFR-TKIs耐藥及生存關(guān)系等。探索HER-2與中晚期肺腺癌EGFR突變患者預(yù)后和EGFR-TKI靶向耐藥的關(guān)系。
　　【研究方法】：
　　1.應(yīng)用免疫組化方法分別檢測各EGFR突變與無突變中晚期肺腺癌標(biāo)本中HER2的表達(dá)情況并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4、　　2.應(yīng)用GraphPAD Prism5軟件分析EGFR突變中晚期肺腺癌病例中HER-2表達(dá)和EGFR-TKI耐藥時(shí)間關(guān)系及和生存的關(guān)系。
　　3.通過RT-PCR檢測HER2 mRNA在肺腺癌細(xì)胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的表達(dá)情況。
　　4.通過Western Blot研究肺腺癌細(xì)胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表達(dá)情況。

5、
　　5.通過生長抑制實(shí)驗(yàn)研究赫賽汀對A549、H1299、PC9、H1975細(xì)胞株生長抑制作用。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0以及GraphPad Prism5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，定量資料組間比較采用 t檢驗(yàn)分析，定性資料組間二分類比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)P=0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　【研究結(jié)果】：
　　1.中晚期肺腺癌HER2表達(dá)和EGFR突變關(guān)系

6、
　　HER-2蛋白在中晚期肺腺癌中表達(dá)較普遍，其主要分布于細(xì)胞膜， EGFR突變陽性的中晚期肺腺癌患者組織中過表達(dá)率為33.33%(28/84)，陰性突變的中晚期肺腺癌患者組織中過表達(dá)率為27.03%(20/74)。
　　通過對 EGFR突變的中晚期肺腺癌 HER-2免疫組化結(jié)果分析發(fā)現(xiàn) HER-2蛋白在大于50歲患者中表達(dá)明顯高于小于等于50歲患者(P＜0.05)，在高分化患者中的過表達(dá)率高于中低分化患者，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P＞0．05)。
　　對 EGFR突變與無突變中晚期肺腺癌總體統(tǒng)計(jì)及依據(jù)臨床病理特征進(jìn)行分層統(tǒng)計(jì)分析均發(fā)現(xiàn)HER2過表達(dá)與EGFR狀態(tài)可能不相關(guān)（P＞0．05）。
　　不同類型的EGFR突變HER-2蛋白表達(dá)不同，敏感突變的21外顯子突變患者 HER-2蛋白過表達(dá)率明顯高于19外顯子突變患者，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.136）。
　　HER2表達(dá)陰性患者平均服用EGFR-TKI的時(shí)間略長于HER2表達(dá)陽性患者。

8、繪制生存分析圖發(fā)現(xiàn)， HER2非過表達(dá)患者生存時(shí)間與HER2過表達(dá)患者的生存時(shí)間未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.肺腺癌細(xì)胞株HER2和EGFR突變關(guān)系分析及赫賽汀對HER2高表達(dá)細(xì)胞生長影響。
　　RT-PCR檢測肺腺癌細(xì)胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975的HER-2 mRNA表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示，各非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的HER2表達(dá)水平不一，其中H1975的HER2表達(dá)最高，A549表

9、達(dá)最低，H1975細(xì)胞的HER2平均表達(dá)水平是A549細(xì)胞的18.87倍。EGFR突變型細(xì)胞系普遍比EGFR野生型細(xì)胞系中HER2表達(dá)高。
　　通過Western Blot研究肺腺癌細(xì)胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表達(dá)情況。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Erbb2（HER2）在各非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中表達(dá)存在差異，Erbb2蛋白表達(dá)水平與 RT-PCR一致,在EGFR突變

10、型的細(xì)胞株中總體的Erbb2蛋白表達(dá)水平明顯高于EGFR野生型的細(xì)胞株。Erbb2在HCC827、H1650、H1975這三細(xì)胞株表達(dá)高，A549表達(dá)最低。
　　通過生長抑制實(shí)驗(yàn)給予赫賽汀觀察A549、H1299、PC9、H1975細(xì)胞株其生長變化。生長抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在HER2高表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株H1299、PC9、H1975中加入赫賽汀后，細(xì)胞生長受到明顯的抑制。而在HER2相對低表達(dá)的A549細(xì)胞株中并未發(fā)現(xiàn)抑制現(xiàn)象。<