HER2在EGFR突變的中晚期肺腺癌中的作用研究.pdf

1、【研究背景】：
　　肺癌不僅是世界范圍最高發(fā)病率的腫瘤，而且是目前死亡率最高的惡性腫瘤。多數肺癌病人確診時已為中晚期，雖有手術及放、化療、靶向等手段，但生存率仍未得到根本改善，肺癌5年存活率仍低于15％。人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2，HER2)基因是重要的癌基因之一，現研究顯示其高表達與腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移和血管生成有關。
　　HER2作為一種重要

2、的致癌因子，已在乳腺癌等腫瘤中被證實對患者的個體化治療和預后具有重要意義，但其在非小細胞肺癌中的作用目前為止仍不明確。而HER2擴增作為EGFR-TKIs獲得性耐藥新機制對EGFR-TKIs耐藥患者有重要意義。但HER2在EGFR突變和無突變的中晚期肺腺癌中表達情況如何，是否有差異，是否與EGFR-TKIs耐藥及生存有關等有待進一步研究。因此，我們通過本研究從臨床標本及細胞學兩方面探索HER-2在EGFR突變的中晚期肺腺癌中的表達及意義

3、。
　　【研究目的】：
　　本研究以中晚期肺腺癌組織標本及肺腺癌細胞株為主要研究對象，研究HER2在 EGFR突變和無突變的中晚期肺腺癌中表達情況，差異情況，與EGFR-TKIs耐藥及生存關系等。探索HER-2與中晚期肺腺癌EGFR突變患者預后和EGFR-TKI靶向耐藥的關系。
　　【研究方法】：
　　1.應用免疫組化方法分別檢測各EGFR突變與無突變中晚期肺腺癌標本中HER2的表達情況并進行統計學分析。

4、　　2.應用GraphPAD Prism5軟件分析EGFR突變中晚期肺腺癌病例中HER-2表達和EGFR-TKI耐藥時間關系及和生存的關系。
　　3.通過RT-PCR檢測HER2 mRNA在肺腺癌細胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的表達情況。
　　4.通過Western Blot研究肺腺癌細胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表達情況。

5、
　　5.通過生長抑制實驗研究赫賽汀對A549、H1299、PC9、H1975細胞株生長抑制作用。
　　6.統計學方法：采用SPSS19.0以及GraphPad Prism5軟件進行統計分析，實驗數據以均數±標準差表示，定量資料組間比較采用 t檢驗分析，定性資料組間二分類比較采用χ2檢驗。檢驗水準P=0.05。P＜0.05為差異有統計學意義。
　　【研究結果】：
　　1.中晚期肺腺癌HER2表達和EGFR突變關系

6、
　　HER-2蛋白在中晚期肺腺癌中表達較普遍，其主要分布于細胞膜， EGFR突變陽性的中晚期肺腺癌患者組織中過表達率為33.33%(28/84)，陰性突變的中晚期肺腺癌患者組織中過表達率為27.03%(20/74)。
　　通過對 EGFR突變的中晚期肺腺癌 HER-2免疫組化結果分析發(fā)現 HER-2蛋白在大于50歲患者中表達明顯高于小于等于50歲患者(P＜0.05)，在高分化患者中的過表達率高于中低分化患者，但差異無統計學

7、意義(P＞0．05)。
　　對 EGFR突變與無突變中晚期肺腺癌總體統計及依據臨床病理特征進行分層統計分析均發(fā)現HER2過表達與EGFR狀態(tài)可能不相關（P＞0．05）。
　　不同類型的EGFR突變HER-2蛋白表達不同，敏感突變的21外顯子突變患者 HER-2蛋白過表達率明顯高于19外顯子突變患者，但未達到統計學意義（P=0.136）。
　　HER2表達陰性患者平均服用EGFR-TKI的時間略長于HER2表達陽性患者。

8、繪制生存分析圖發(fā)現， HER2非過表達患者生存時間與HER2過表達患者的生存時間未發(fā)現統計學差異。
　　2.肺腺癌細胞株HER2和EGFR突變關系分析及赫賽汀對HER2高表達細胞生長影響。
　　RT-PCR檢測肺腺癌細胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975的HER-2 mRNA表達。RT-PCR結果顯示，各非小細胞肺癌細胞株中的HER2表達水平不一，其中H1975的HER2表達最高，A549表

9、達最低，H1975細胞的HER2平均表達水平是A549細胞的18.87倍。EGFR突變型細胞系普遍比EGFR野生型細胞系中HER2表達高。
　　通過Western Blot研究肺腺癌細胞株A549、H1299、PC9、HCC827、H1650、H1975中的HER2蛋白表達情況。Western blot實驗結果顯示Erbb2（HER2）在各非小細胞肺癌細胞株中表達存在差異，Erbb2蛋白表達水平與 RT-PCR一致,在EGFR突變

10、型的細胞株中總體的Erbb2蛋白表達水平明顯高于EGFR野生型的細胞株。Erbb2在HCC827、H1650、H1975這三細胞株表達高，A549表達最低。
　　通過生長抑制實驗給予赫賽汀觀察A549、H1299、PC9、H1975細胞株其生長變化。生長抑制實驗發(fā)現，在HER2高表達的非小細胞肺癌細胞株H1299、PC9、H1975中加入赫賽汀后，細胞生長受到明顯的抑制。而在HER2相對低表達的A549細胞株中并未發(fā)現抑制現象。<