升陷通絡(luò)湯對肺纖維化干預(yù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景
　　特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis，IPF)對人類的危害嚴(yán)重，是一種致死率、致殘率高的疾病，近年來發(fā)病率有增高的趨勢。本病的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，缺乏有效的治療藥物。多數(shù)研究認(rèn)為，肺泡上皮細(xì)胞損傷、成纖維細(xì)胞灶的形成以及細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix，ECM)過度沉積是IPF的主要病理特征，最終肺泡結(jié)構(gòu)破壞，形成肺泡腔內(nèi)完全性纖維化和囊泡狀的蜂窩肺，導(dǎo)致肺

2、功能持續(xù)性和進(jìn)行性損害。IPF的治療目前尚無肯定有效的藥物，中醫(yī)中藥治療具有一定優(yōu)勢，可減輕IPF患者的臨床癥狀、延緩肺功能下降，但其作用機(jī)制有待闡明。近年來，我們通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，宗氣下陷是IPF發(fā)生的始動因素，在此基礎(chǔ)上發(fā)生外邪痹阻，久病入絡(luò)，與內(nèi)生痰瘀結(jié)合，痰瘀進(jìn)一步痹阻肺絡(luò)，終至“宗氣虛陷、肺絡(luò)痹阻、痰瘀內(nèi)結(jié)”的病因病機(jī)，臨床以“益氣升陷、疏通肺絡(luò)、化痰活血”為主要功效的升陷通絡(luò)湯來治療IPF初步取得較好療效。
　　目的:

3、觀察升陷通絡(luò)湯對實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺組織中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖體40S小亞基S6蛋白激酶(p70S6K)信號通路和基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase，MMPs)/基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(TissueInhibitor of Metalloproteinases，TIMPs)系統(tǒng)的調(diào)控作用，以及對Ⅰ型膠原(TypeⅠ Collagen Protein, Col TypeⅠ)、Ⅲ型膠原(T

4、ypeⅢ CollagenProtein, Col TypeⅢ)、Ⅳ型膠原(TypeⅣCollagen Protein, Col TypeⅣ)、透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid，HA)、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)等ECM蛋白水平的影響，揭示mTOR/p70S6K信號通路和MMPs/TIMPs系統(tǒng)與ECM蛋白沉積的關(guān)系;觀察在造模后不同時間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)，大鼠肺組織中ECM蛋白、mTOR/p70S6K信號通路、MM

5、Ps/TIMPs系統(tǒng)的表達(dá)差異;觀察升陷通絡(luò)湯對大鼠肺功能的影響。
　　方法:選取健康雄性SD大鼠96只，隨機(jī)分為空白對照組12只、模型組12只、升陷通絡(luò)湯第3天干預(yù)組12只、升陷通絡(luò)湯第14天干預(yù)組12只、升陷通絡(luò)湯第28天干預(yù)組12只、N-乙酰半胱氨酸第3天干預(yù)組12只、N-乙酰半胱氨酸第14天干預(yù)組12只、N-乙酰半胱氨酸第28天干預(yù)組12只。升陷通絡(luò)湯和N-乙酰半胱氨酸組大鼠分別于造模后第3、14、28天起予相應(yīng)劑量的升陷

6、通絡(luò)湯中藥或N-乙酰半胱氨酸連續(xù)治療90天。療程結(jié)束后，觀察各組大鼠肺功能指標(biāo)(FVC、FEV0.3/FVC％、PEF、MVV、Cdyn)變化，并取大鼠右肺中葉進(jìn)行病理學(xué)觀察。HE染色觀察升陷通絡(luò)湯、N-乙酰半胱氨酸對肺纖維化大鼠肺泡炎及肺纖維化程度的影響;免疫印跡法及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription-PCR，RT-PCR)法檢測各組大鼠肺組織中mTOR、p70S6K、MMP2、TIMP1、Col Typ

7、eⅠ、Col TypeⅢ、Col TypeⅣ、HA、FN蛋白量和基因表達(dá)水平。
　　結(jié)果:肺功能結(jié)果顯示，升陷通絡(luò)湯可以改善大鼠肺功能Cdyn指標(biāo)(P＜0.05)，但對肺功能FVC、FEV0.3/FVC、PEF、MVV指標(biāo)改善不明顯(P＞0.05);病理結(jié)果顯示，模型組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞、間質(zhì)纖維增生、多量炎癥細(xì)胞浸潤，升陷通絡(luò)湯組和N-乙酰半胱氨酸組較模型組有所減輕;免疫印跡及RT-PCR結(jié)果顯示，升陷通絡(luò)湯各組大鼠肺組織中ECM

8、蛋白(Col TypeⅠ、Col TypeⅢ、Col TypeⅣ、HA、FN)、mTOR/p70S6K信號通路和MMPs/TIMPs系統(tǒng)的mRNA相對表達(dá)量較模型組均有降低(P＜0.01)，并且升陷通絡(luò)湯第3天干預(yù)組大鼠ECM蛋白、mTOR/p70S6K信號通路和MMPs/TIMPs系統(tǒng)的蛋白量較模型組也均有降低(P＜0.01)，中藥第3天、第14天干預(yù)組HA的mRNA相對表達(dá)量低于對應(yīng)西藥組(P＜0.05)，中藥第14天、第28天干預(yù)

9、組Col TypeⅠ、FN的mRNA相對表達(dá)量顯著低于對應(yīng)西藥組(P＜0.05)，中藥第3天干預(yù)組MMP2、TIMP1的mRNA相對表達(dá)量低于中藥第14天、第28天干預(yù)組(P＜0.01)。
　　結(jié)論:升陷通絡(luò)湯可通過調(diào)控mTOR/p70S6K信號通路、MMPS/TIMPs系統(tǒng)等相關(guān)機(jī)制來抑制ECM的沉積，并且能改善大鼠炎性細(xì)胞浸潤和纖維組織的增生、減輕肺纖維化程度、延緩肺功能中Cdyn值的下降，在造模后第3天開始干預(yù)的作用較其余各