人胚胎干細(xì)胞hESCs對HepG2-A549兩種腫瘤細(xì)胞的作用研究.pdf

1、目的：建立hESCs-HepG2、hESCs-A549非接觸式共培養(yǎng)體系，探究人胚胎干細(xì)胞hESCs體外對人肝癌細(xì)胞系HepG2和人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549在侵襲遷移、增殖、凋亡等生物學(xué)行為方面的影響，為腫瘤的干細(xì)胞治療奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：利用Transwell小室將hESCs與HepG2、A549進(jìn)行共培養(yǎng)，建立hESCs-HepG2、hESCs-A549非接觸式共培養(yǎng)體系，為腫瘤細(xì)胞提供hESCs微環(huán)境。將與hESCs共培養(yǎng)的

2、HepG2、A549作為Co-HepG2、Co-A549實(shí)驗(yàn)組；單獨(dú)培養(yǎng)在小室內(nèi)的腫瘤細(xì)胞作為HepG2、A549對照組。與hESCs共培養(yǎng)后，Transwel法檢測HepG2、A549的侵襲、遷移能力；MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖情況，F(xiàn)low Cytometry檢測hESCs對HepG2、A549細(xì)胞周期的影響，Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞的凋亡情況。qRT-PCR、Western

3、Blot檢測各組細(xì)胞Cyclind1、CDK4、P21、Bax、Bcl2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與hESCs共培養(yǎng)后，HepG2的侵襲能力顯著降低；A549的侵襲能力與對照組比明顯降低(P＜0.05)；在遷移實(shí)驗(yàn)中，Co-HepG2組中穿過Transwell底膜的細(xì)胞數(shù)量與HepG2對照組比顯著減少(P＜0.05)；Co-A549組通過小室底膜的細(xì)胞數(shù)量與A549對照組比顯著減少(P＜0.05)

4、。與hESCs共培養(yǎng)后，Co-HepG2、Co-A549實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖能力受到顯著抑制，且隨著時(shí)間增加，該抑制作用越明顯(P＜0.05)；Flow Cytometry檢測發(fā)現(xiàn)Co-HepG2組處于G1期的細(xì)胞與HepG2對照組比明顯增多(P＜0.05)，Co-A549實(shí)驗(yàn)組中G1期細(xì)胞與A549對照組比組顯著增加；通過qRT-PCR檢測細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)：與對照組比，Co-HepG2細(xì)胞內(nèi)CDK4、CyclinD1 mRNA

5、相對表達(dá)量顯著降低，P21表達(dá)著增加(P＜0.05)；Co-A549中CDK4、CyclinD1 mRNA相對表達(dá)量與A549對照組比顯著降低，P21表達(dá)顯著增加(P＜0.05)；Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步顯示CDK4、CyclinD1、P21蛋白表達(dá)趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Hoechst凋亡染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Co-HepG2、Co-A549實(shí)驗(yàn)組中固縮、變形、出現(xiàn)濃染的細(xì)胞核數(shù)量較H

6、epG2、A549對照組多；進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)Co-HepG2細(xì)胞凋亡率為16.77%，與HepG2對照組2.93%比顯著增加(P＜0.05)，Co-A549組中細(xì)胞凋亡率12.73%與A549對照組1.9%比顯著增加(P＜0.05)；通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：在Co-HepG2中凋亡相關(guān)基因Bcl2相對表達(dá)與HepG2對照組比顯著降低，Bax表達(dá)顯著增加(P＜0.05)；與A549對照組比，Co-A549中Bcl2 mRNA相對表達(dá)量顯