人胚胎干細胞來源的間充質(zhì)干細胞用于腫瘤基因治療的研究.pdf

1、間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是中胚層發(fā)育的早期細胞，具備成體干細胞的基本特性可在體外擴增、具有多向分化潛能，體內(nèi)注射能夠歸巢到腫瘤部位并且在腫瘤部位聚集增殖。人胚胎干細胞(human embryonic stem cells，hESCs)是一種來自于囊胚的內(nèi)細胞團的全能干細胞具有自我更新和多向分化潛能，遺傳特性穩(wěn)定，并能夠在體外長期擴增而不喪失其分化的潛能。體外分化誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)hESCs可向MSCs

2、方向分化，但對hESCs體內(nèi)能否向MSCs分化尚不清楚，本課題將探索從hESCs體內(nèi)分化產(chǎn)物——畸胎瘤中分離MSCs，并研究其作為腫瘤基因治療的細胞載體的可行性。 第一章：hESCs體內(nèi)分化獲取畸胎瘤，并從畸胎瘤中分離MSCs。 目的：通過hESCs體內(nèi)分化獲取畸胎瘤，并從畸胎瘤中分離MSCs。 方法：約5×106個hESCs(表達綠色熒光蛋白)注射至SCID-beige小鼠后腿肌間隙，8-10周后解剖小鼠取出畸

3、胎瘤，病理切片可見三個胚層組織；同時將瘤組織剪碎、胰酶消化，用含有10ng/uL堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的MSCs專用培養(yǎng)基Mesencult進行貼壁培養(yǎng)。 結(jié)果：經(jīng)過連續(xù)幾次傳代，獲得了較純的hESC來源的MSCs(hESC-MSCs)，熒光顯微鏡下均可見綠色熒光；核型檢測為正常人類核型46，XX;該hESC-MSCs具有和骨髓來源的MSCs相似的形態(tài)特征

4、，表現(xiàn)為短梭形或成纖維細胞樣形態(tài)；對其進行流式細胞學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，CD105、CD90、CD73、CD29和CD49b為陽性，CD14、CD34和CD45為陰性；體外誘導(dǎo)分化表明hESC-MSCs具有向脂肪細胞和骨細胞分化的潛能。 結(jié)論：結(jié)果表明可從hESC的畸胎瘤中分離MSCs。 第二章：hESC-MSCs向腫瘤遷移初步研究。 目的：探索hESC-MSCs靜脈內(nèi)注射后在小鼠腫瘤組織中遷移情況，及其作為腫瘤基因治療細

5、胞載體的可行性。 方法：通過BALB/C裸鼠右背部皮下注射2.5x106個BEL-7402細胞，建立腫瘤小鼠模型，當腫瘤組織生長至4-5mm左右時，分別通過尾靜脈注射和直接腫瘤組織內(nèi)注射5x104個hESC-MSCs細胞/裸鼠，注射6天后解剖裸鼠取出瘤組織，冰凍切片觀察hESC-MSCs在裸鼠體內(nèi)及腫瘤組織中的分布情況。 結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)裸鼠腫瘤組織中可見表達綠色熒光的細胞，而在裸鼠的其他器官組織中未能檢測到綠色熒光。