白楊素磺酰胺衍生物的合成與抗腫瘤活性評(píng)價(jià).pdf

1、以天然產(chǎn)物為先導(dǎo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，是研制抗腫瘤藥物的重要策略之一。白楊素具有抗腫瘤作用，但因其腸道吸收少，易被糖基化代謝，靶向性差，生物利用度低限制了它的臨床應(yīng)用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)：5-羥基-7-甲氧基-N-（4-甲基苯基）-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-磺酰胺（化合物4a）、5-羥基-7-甲氧基-N-（3-乙炔基苯基）-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮-8-磺酰胺（化合物4d）具有較強(qiáng)的抗肝癌細(xì)胞增殖作用。本文主要

2、進(jìn)行目標(biāo)化合物的急性毒性實(shí)驗(yàn)并探究作用機(jī)制。
　　在化合物4a的急性毒性實(shí)驗(yàn)預(yù)實(shí)驗(yàn)中，按照2 g/kg劑量口服灌胃給藥，小鼠均未死亡，測(cè)得化合物4a的血藥濃度偏低?；衔?a水中溶解度為0.03μg/mL，口服給藥后因水溶性差難被胃腸黏膜壁吸收，進(jìn)而無(wú)法得出最大致死量。本文采用液體制劑技術(shù)和結(jié)構(gòu)修飾兩種策略提高化合物4a在水中的溶解度。
　　通過(guò)加入潛溶劑、表面活性劑、制備成微乳三種制劑技術(shù)改善化合物4a的溶解能力。當(dāng)微乳處

3、方為油酸乙酯：Cremophor RH40：EtOH：H2O=4.5:19.1:6.4:70（體積比）時(shí)，4a在水中的溶解度可達(dá)224.83μg/mL。雖然溶解度提高了7493倍，但是溶解度仍不能滿足體內(nèi)研究的要求，還需要繼續(xù)進(jìn)行制劑處方篩選。
　　在化合物4a分子中引入親水性基團(tuán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，制備了兩類化合物。一是白楊素的5位連接羧基的衍生物。另一個(gè)是白楊素7位連接羥基衍生物。雖然改造后的化合物在水中的溶解度提高了，但是對(duì)Hep

4、G2細(xì)胞的抑制活性下降，這表明5位和7位的結(jié)構(gòu)改造破壞了分子與靶標(biāo)的結(jié)合，不是提高水溶性的適宜修飾位點(diǎn)。
　　MTT法證實(shí)了白楊素磺酰胺衍生物4a、4d能抑制HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)，本文繼續(xù)探究其抗增殖機(jī)制與作用靶點(diǎn)。采用Annexin V FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)在檢測(cè)化合物4a、4d對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的影響，實(shí)驗(yàn)表明，4a對(duì)肝癌細(xì)胞的作用既有凋亡也有壞死，4d則主要誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡（加入4d孵育24h后早期凋亡率為36.94%

5、）。應(yīng)用流式細(xì)胞儀碘化丙啶染色法檢測(cè)加藥后HepG2細(xì)胞的細(xì)胞周期，結(jié)果顯示化合物4a、4d均將肝癌HepG2細(xì)胞阻滯在G2/M期，G2期細(xì)胞比率分別為89.85%、95.76%。采用雙熒光素報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)化合物對(duì)HIF-1的轉(zhuǎn)錄活性的抑制作用，化合物4a、4d對(duì)HIF-1轉(zhuǎn)錄的均有較強(qiáng)的抑制活性，4a抑制HIF-1轉(zhuǎn)錄的活性為IC50>0.005μM，4d抑制HIF-1轉(zhuǎn)錄的活性為0.045μM。
　　根據(jù)化合物作用于HepG