肌萎縮側(cè)索硬化G93A SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)源性神經(jīng)前體細(xì)胞增殖,遷移,分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　觀察分析成年正常野生型小鼠及不同發(fā)病階段 G93A-SOD1 ALS轉(zhuǎn)基因小鼠腦相關(guān)解剖區(qū)NPCs的增殖、遷移、分化情況，為進(jìn)一步調(diào)控NPCs的增殖、定向遷移、分化提供理論依據(jù)，為治療ALS提供可能途徑。
　　方法：
　　構(gòu)建G93A-SOD1 C57BL/6J轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型，用PCR技術(shù)檢測(cè)篩選轉(zhuǎn)基因小鼠動(dòng)物模型。將G93A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠分為未發(fā)病階段（60-70天），發(fā)病階段（90-100天）

2、和進(jìn)展階段（120-130天）。腹腔注射Brdu（5-溴脫氧尿核苷）標(biāo)記野生型和 G93A-SOD1 C57BL/6J轉(zhuǎn)基因小鼠增殖的新生細(xì)胞。采用熒光免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù)，用NPCs生物學(xué)標(biāo)志物（Nestin, Vimentin）標(biāo)記NPCs，用Brdu標(biāo)記增殖的新生細(xì)胞，用NeuN標(biāo)記神經(jīng)元細(xì)胞，用GFAP標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞，用 Olig標(biāo)記少突膠質(zhì)細(xì)胞。在顯微鏡同一視野、同一放大倍數(shù)下，用圖像處理技術(shù)將不同染色的陽(yáng)性細(xì)胞兩兩疊加成像

3、，觀察是否存在共免疫反應(yīng)。統(tǒng)計(jì)不同發(fā)病階段不同解剖區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，觀察陽(yáng)性細(xì)胞分布特征。分析野生型和G93A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠腦相關(guān)解剖區(qū)NPCs增殖、定向遷徙、分化特征。結(jié)果：
　　1、VCCs廣泛分布于成年野生型小鼠腦的多個(gè)部位，包括室管膜區(qū)、室管膜下區(qū)、海馬、大腦皮層、嗅球。
　　2、G93A-SOD1 ALS轉(zhuǎn)基因小鼠腦干腹側(cè)多個(gè)核團(tuán)出現(xiàn)VCCs的表達(dá)，隨著疾病的進(jìn)展，VCCs陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行性增多，存在進(jìn)展組＞起病

4、組＞未發(fā)病組的規(guī)律。
　　3、腦干增多的VCCs幾乎全與GFAP存在共免疫反應(yīng)性，提示VCCs幾乎全部分化成星形膠質(zhì)細(xì)胞。
　　4、與正常對(duì)照相比，G93A-SOD1 ALS轉(zhuǎn)基因小鼠的嗅皮層、扣帶回、運(yùn)動(dòng)皮層的VCCs數(shù)量減少。
　　5、增多的VCCs極少數(shù)BrdU陽(yáng)性，提示增多的VCCs可能有兩種來(lái)源：1）少數(shù)與BrdU存在共免疫反應(yīng)的VCCs為增殖的新生細(xì)胞；2）大多數(shù)與BrdU不存在共免疫反應(yīng)的VCCs可能是增

5、殖分化晚期的NPCs，這部分VCCs也有可能是從其他部位遷移分化而來(lái)。
　　6、在G93A-SOD1 ALS轉(zhuǎn)基因小鼠腦橋與延髓，所有nestin陽(yáng)性細(xì)胞均表達(dá)Vimentin，僅有一部分Vimentin陽(yáng)性細(xì)胞與nestin存在共免疫反應(yīng)，說(shuō)明VCCs大部分是分化晚期的NPCs。
　　結(jié)論：
　　正常成年野生型小鼠腦內(nèi)多個(gè)部位廣泛存在大量 NPCs。ALS的發(fā)病刺激NPCs在腦干腹側(cè)多個(gè)核團(tuán)大量增殖，小部分處于增殖早