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文檔簡介
1、目的:
利用G93A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠作為肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)動物模型,初步探明ALS小鼠不同疾病階段脊髓受損解剖區(qū)神經(jīng)元致病蛋白(FUS/TLS)與ALS運(yùn)動神經(jīng)元進(jìn)行性死亡之間的相關(guān)性,尋找調(diào)控神經(jīng)元致病蛋白FUS/TLS在ALS小鼠的異常表達(dá)及分布,為ALS的發(fā)病機(jī)制探索可能途徑。
方法:
構(gòu)建G93A-SOD1C57BL/6J轉(zhuǎn)基因小鼠動物模型,用PCR技術(shù)檢測和篩選出動物模型,甲醛固定G93
2、A-SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠,完整取出小鼠脊髓、腦,經(jīng)梯度脫水、包埋,做冰凍切片;行熒光免疫組織化學(xué)雙標(biāo)技術(shù),分別標(biāo)記神經(jīng)元致病蛋白肉瘤融合/脂肪肉瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FUS/TLS)、神經(jīng)元細(xì)胞,星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞。每一解剖區(qū)同時進(jìn)行雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色,在熒光顯微鏡的同一視野、同一放大倍數(shù)下進(jìn)行觀察,并用圖像處理技術(shù)將不同染色的陽性細(xì)胞兩兩疊加成像,統(tǒng)計并分析不同疾病階段、不同解剖區(qū)域FUS/TLS陽性細(xì)胞分布特征及數(shù)量,以及與各類神
3、經(jīng)細(xì)胞之間的關(guān)系。
結(jié)果:
1、FUS/TLS在SOD1野生型轉(zhuǎn)基因小鼠和SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的未發(fā)病階段脊髓中幾乎無表達(dá),只在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)病期、進(jìn)展期的脊髓中表達(dá)。
2、FUS/TLS在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的發(fā)病期和進(jìn)展期階段的表達(dá)因脊髓不同解剖區(qū)域而顯著不同,依次為胸段>頸段>腰段,前索>側(cè)索>灰質(zhì)前角>中央管周圍灰質(zhì)>灰質(zhì)后角>后索。
3、FUS/TLS的異常表達(dá)
4、發(fā)生在星形膠質(zhì)細(xì)胞中,而在其它的神經(jīng)細(xì)胞如神經(jīng)元細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞未見陽性表達(dá)。
4、FUS/TLS僅在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)病期的星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞核中表達(dá),而在進(jìn)展期時幾乎所有的FUS/TLS在星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),少量在細(xì)胞核中表達(dá)。
5、FUS/TLS在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因小鼠的發(fā)病期和進(jìn)展期中脊髓的表達(dá)量和神經(jīng)元死亡呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
結(jié)論:
FUS/TLS在ALSSOD1G93A
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