幽門螺桿菌感染在非酒精性脂肪肝病發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、背景和目的：
　　近年來，非酒精性脂肪肝?。╪onalcoholic fatty liver disease,NAFLD）的全球患病率隨著人們生活水平的提高及生活方式的轉(zhuǎn)變逐年上升。大量研究表明， NAFLD與肥胖、高脂血癥及糖尿病等慢性疾病密切相關(guān)，其對人類身體健康及生活質(zhì)量帶來極大的威脅是顯而易見的。然而，NAFLD發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚，且治療手段也極為有限。因此，明確NAFLD的病因及早期預(yù)防尤為重要。
　　幽門螺桿菌

2、（Helicobacter pylori, Hp）是一種革蘭陰性微需氧菌，其全球人群感染率很高，是人類最常見的胃腸道感染性病原體之一，已被公認(rèn)是胃腸道疾病包括慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)性淋巴組織（MALT）淋巴瘤及胃癌等重要的環(huán)境致病因素。隨著研究的不斷深入，越來越多的臨床資料表明Hp感染也可能與多種胃腸外疾病包括血液系統(tǒng)疾病、心血管疾病及代謝類疾病等有關(guān)。近來不少研究報道Hp感染可能與NAFLD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。NAFLD作為

3、代謝綜合癥（metabolism syndrome，MS）在肝臟的表現(xiàn)之一，胰島素抵抗（insulin resistance，IR）介導(dǎo)的肝臟脂肪異位沉積為其致病的中心環(huán)節(jié)。大量研究表明Hp感染在IR發(fā)生中發(fā)揮著極為重要的作用。因此，Hp持續(xù)感染是否會引發(fā)NAFLD？高脂飲食作為NAFLD重要的環(huán)境致病因素與Hp感染是否具有協(xié)同作用導(dǎo)致NAFLD？如果Hp感染會導(dǎo)致NAFLD的發(fā)生，其可能的致病機(jī)制是什么？這一系列問題仍有待進(jìn)一步研究。

4、
　　材料與方法：
　　1.建立Hp（SS1、NCTC11637）標(biāo)準(zhǔn)菌株感染 C57BL/6小鼠的動物模型，分別給予普通飲食和高脂飲食。
　　2.檢測不同飲食干預(yù)24周后Hp感染組和非感染組小鼠的體重、血脂及肝酶的水平。應(yīng)用全自動生化儀檢測血脂包括總膽固醇（total cholesterol, T-CHOL）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL-C）、甘油三酯（triglycerid

5、e,TG）,及肝功能轉(zhuǎn)氨酶包括天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase,AST）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase,ALT）。
　　3.于不同飲食干預(yù)24周后處死動物，分離肝臟組織，稱重，并計算質(zhì)量指數(shù)，HE染色觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變，并采用NAS評分系統(tǒng)對肝臟組織脂肪變性及炎癥情況進(jìn)行評分，油紅O染色直接觀察肝臟組織脂肪沉積情況，并采用甘油三酯試劑盒法對肝臟組織

6、甘油三酯含量進(jìn)行定量檢測。
　　4.采用Western blot法測定肝臟組織IRS/PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)；采用Real-time PCR方法檢測肝臟組織脂肪合成相關(guān)酶（PPARγ，F(xiàn)ASN，SREBP1）的mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　1.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C57BL/6小鼠體重及血生化指標(biāo)的影響
　　（1）高脂飲食組小鼠體重明顯高于普通飲食組（P＜0.01），而Hp感染組與非感染組間

7、小鼠體重?zé)o差異（p＞0.05）。
　?。?）高脂飲食組小鼠血漿LDL-C明顯高于普通飲食組（P＜0.01），其中高脂飲食中HpSS1感染組小鼠血漿LDL-C也明顯高于非感染組（P＜0.01）；而普通飲食中Hp感染組與非感染組無明顯差異（p＞0.05）。
　?。?）高脂飲食組小鼠血漿T-CHOL明顯高于普通飲食組（P＜0.01），而Hp感染組與未感染組間小鼠血漿T-CHOL無明顯差異（p＞0.05）；無論是高脂飲食組與普通飲食

8、組間還是 Hp感染組與非感染組間小鼠血漿 TG均無明顯差異（p＞0.05）。
　?。?）高脂飲食組中HpSS1感染亞組血清ALT較普通飲食組中HpSS1感染亞組明顯增大（P＜0.01）；在高脂飲食中HpSS1感染組小鼠血清ALT較非感染組明顯增大（P＜0.01）；而普通飲食中Hp感染組血清ALT與非感染組比無明顯差異（p＞0.05）。高脂飲食組小鼠血清AST與普通飲食組比無明顯差異（p＞0.05）；無論是高脂飲食組與普通飲食組間

9、Hp感染組與未感染組間血清 AST均無明顯差異（p＞0.05）。
　　2.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C57BL/6小鼠肝臟脂肪含量的影響
　?。?）高脂飲食組小鼠肝臟重量與普通飲食組比無明顯差異（p＞0.05），高脂飲食組中HpSS1感染組與非感染組比也無明顯差異（p＞0.05）。
　?。?）高脂飲食組肝臟組織HE染色可見彌漫分布的脂滴，而普通飲食組未見明顯異常，且高脂飲食組中 HpSS1感染組與非感染組比肝臟細(xì)胞脂滴更

10、大數(shù)量更多，NAS評分具有明顯差異（P＜0.01）。
　?。?）肝臟組織油紅O染色后可見高脂飲食組小鼠較普通飲食組比脂質(zhì)累積更明顯，且高脂飲食組中HpSS1感染組較非感染組也更明顯。
　?。?）高脂飲食組小鼠肝臟TG含量明顯高于普通飲食組（P＜0.01），且高脂飲食中HpSS1感染組較非感染組比明顯增高（P＜0.05）；而普通飲食組中Hp感染組與非感染組無明顯差異（p＞0.05）。
　　3.不同飲食干預(yù)后Hp感染對C5

11、7BL/6小鼠肝組織IRS/PI3K/Akt信號通路及肝臟組織脂肪代謝關(guān)鍵酶表達(dá)的影響
　?。?）單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組與對照組比小鼠肝組織p-Akt(Ser473)的表達(dá)均無明顯差異（p＞0.05），而高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組與對照組比顯著下降（P＜0.01）。
　?。?）單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組小鼠肝組織IRS1的表達(dá)與對照組比無明顯差異（p＞0.05）；且高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組較對照

12、組比也無明顯差異（p＞0.05）。
　　（3）單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組小鼠肝組織p-IRS1(Tyr896)的表達(dá)與對照組比無明顯差異（p＞0.05）；而高脂飲食聯(lián)合HpSS1感染組較對照組小鼠肝組織p-IRS1(Tyr896)的表達(dá)顯著下降（P＜0.01）。
　　（4）單純高脂飲食組或單純HpSS1感染組與對照組比，小鼠肝臟組織PPARγ、SREBP1及FASN的mRNA表達(dá)水平均無明顯差異（p＞0.05），而