抗內(nèi)皮素A型受體抗體與系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)肺動(dòng)脈高壓的相關(guān)性研究.pdf

1、背景及目的：
　　系統(tǒng)性硬化癥(Systemic sclerosis, SSc)相關(guān)肺動(dòng)脈高壓（Pulmonary Arterial Hypertension, PAH）是導(dǎo)致SSc患者死亡的重要原因之一。因?yàn)槠淦鸩‰[匿，臨床表現(xiàn)常不典型，早期診斷困難，治療效果不理想。目前對(duì)于 SSc-PAH早期診斷，治療，預(yù)后評(píng)估仍是困擾風(fēng)濕免疫科醫(yī)生的重要難題。
　　肺動(dòng)脈高壓(PAH)是 SSc相關(guān)的肺部疾病中預(yù)后最差的并發(fā)癥之一，其

2、病理變化與內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙及局部炎癥有關(guān)，在晚期則表現(xiàn)為肺血管平滑肌細(xì)胞過度增殖、凋亡減少。在PAH的病理過程中內(nèi)皮素-1( Endothelin-1, ET-1)起到了非常重要的作用。ET-1是由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的21肽，作為一種強(qiáng)力持久的血管收縮劑，促進(jìn)血管壁的肥厚和纖維化的發(fā)生。ET1正是通過與其受體(Endothelin receptor,ETR)（A型受體、B型受體）結(jié)合發(fā)揮收縮血管的作用，特別是位于肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮

3、細(xì)胞的內(nèi)皮素 A型受體(Endothelin Receptor Type A,ETRA)，是觸發(fā)血管的收縮主要因素，同時(shí)在細(xì)胞增殖和肺動(dòng)脈免疫微環(huán)境的調(diào)控中發(fā)揮了重要的作用。本研究擬通過檢測抗內(nèi)皮素 A型受體抗體(Anti-Endothelin Receptor Type A Autoantibodies ETRA-Ab)在SSc-PAH患者血清中的陽性率和特異性，從而探索ETRA-Ab與SSc-PAH發(fā)病及疾病嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。進(jìn)而

4、探討抗內(nèi)皮素A型受體抗體作為協(xié)助早期診斷SSc-PAH生物標(biāo)記物的可能性。并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí) ETRA-Ab作為功能性抗體，在SSc-PAH發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　1、臨床觀察：共納入24例SSc-PAH樣本。同時(shí)選擇24例相匹配SSc非PAH對(duì)照，24份正常對(duì)照。記錄臨床數(shù)據(jù)，心彩超測肺動(dòng)脈收縮壓(PASP)。其中5例SSc-PAH行右心導(dǎo)管檢測。測定各組6分鐘步行距離（6WMD）。使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（

5、ELISA）法檢測以上各組血漿中的抗ETAR抗體，計(jì)算陽性率。
　　2、建立MCT肺動(dòng)脈高壓大鼠模型：共36只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組（n=12）、MCT組（n=12）、MCT+ETRA-Ab組（n=12）。MCT組和MCT+ETRA-Ab組行腹腔注射野百合堿（Monocrotatine，MCT），MCT+ETRA-Ab組在腹腔注射MCT后第1~3周經(jīng)尾靜脈給予注入多克隆IgG ETRA抗體，每周3次。
　　3、平均

6、肺動(dòng)脈壓力（mPAP）測定：于MCT造模后4周，經(jīng)右頸外靜脈插管，用Medlab-E生物機(jī)能信號(hào)采集系統(tǒng)測mPAP。并使用SPSS20.0分析各組間的差異。
　　4、右心肥厚指數(shù)(RVHI％)測定：取出心臟，分離左右心室和室間隔，分別稱量右心室壁（RV）的質(zhì)量和左心室和室間隔（LV+S）的質(zhì)量，計(jì)算右心肥厚指數(shù)=RV/(LV+S)。分析各組間的差異。
　　5、肺血管形態(tài)學(xué)觀察：切取完整右肺上葉，甲醛固定、脫水、浸蠟、包埋、切

7、片、烘干、HE染色。光鏡下觀察各組大鼠肺小動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化。比較各組肺血管肌型動(dòng)脈（MA）,部分肌型動(dòng)脈（PMA）,無肌型動(dòng)脈（NMA）比例的變化。
　　6、檢測各組血漿中炎癥因子白介素（interleukin IL）-6、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor TNF）-α的水平，分析各組間差異。
　　結(jié)果：
　　1、 SSc-PAH組與SSc非PAH組ETRA抗體陽性率比較前者ETRA抗體陽性率50

8、.0%。后者ETRA抗體陽性率為12.5%，正常對(duì)照組ETRA抗體陽性率為0%。陽性率比較有顯著性差異（P＜0.01）。
　　2、SSc-PAH患者血清中ETRA抗體滴度水平與肺動(dòng)脈壓力PASP有相關(guān)性(r=0.3439 P=0.0321)。而ETRA抗體滴度水平與6分鐘步行距離測試結(jié)果之間存在顯著的負(fù)相關(guān)(r=-0.3221， P=0.0391)，與 NT-proBNP結(jié)果呈現(xiàn)相關(guān)性（r=0.3335, P=0.0318）。與末

9、梢循環(huán)檢測指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.3439，P=0.0321）。
　　3、建立MCT模型第4周，注射10%水合氯醛，腹腔麻醉，經(jīng)頸外靜脈插管，行三組間mPAP（mmHg）比較：正常對(duì)照組（17.3±1.1）。MCT組（30.8±2.0）、MCT+ETRA-Ab組（34.5±3.1）（P＜0.05）。
　　4、測壓后處死動(dòng)物右室分離行右心肥厚指數(shù)比較：MCT組（0.355±0.051）、MCT+ETRA-Ab組（0.402±0.

10、049）（P＜0.05）。
　　5、肺組織HE染色，比較MA、PMA、NMA在三組中所占比例（PMA、PPMA、PNMA）的變化：MCT+ETRA-Ab組中PMA、PPMA高于MCT對(duì)照組（P＜0.05），兩者均明顯正常對(duì)照組。
　　6、血漿炎癥因子測定：MCT組、MCT+ETRA-Ab組中IL-6、TNF-α(pg/ml)水平明顯高于正常對(duì)照組。但MCT+ETRA-Ab組較MCT組升高更加顯著（P＜0.05）。
　　

11、結(jié)論：
　　1、ETRA-Ab對(duì)于SSc-PAH的診斷有較好的敏感性和較高的特異性，從而提示ETRA-Ab可以作為SSc-PAH早期診斷的新型生物標(biāo)記物。
　　2、SSc-PAH患者中ETRA-Ab滴度與PASP、NT-proBNP正相關(guān)，與6分鐘步行距離測試距離負(fù)相關(guān)。提示ETRA-Ab滴度可以作為評(píng)估患者病情，判斷預(yù)后的指標(biāo)。
　　3、ETRA-Ab對(duì)MCT大鼠的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、右心肥厚指數(shù)、肺血管形態(tài)變化指數(shù)升高