亞硝酸鹽對人肝癌SMMC-7721細胞干細胞樣表型特征的影響.pdf

1、背景:在大多數(shù)人的認識中，亞硝酸鹽是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的“罪魁禍?zhǔn)住?，認為亞硝酸鹽有很強的致癌作用；而國外許多研究表明，亞硝酸鹽對心血管疾病有很好的保護作用。近年來，隨著研究者對腫瘤領(lǐng)域研究的不斷深入，有許多的證據(jù)表明原發(fā)或轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織或細胞中存在著數(shù)量不等的類似于普通干細胞的腫瘤干細胞（cancer stem cells,CSCs）亞群。然而，腫瘤干細胞究竟是如何被調(diào)控的還不清楚。大量研究表明腫瘤微環(huán)境中的一些生物介質(zhì)可以導(dǎo)致普通的腫瘤細

2、胞和腫瘤干細胞之間發(fā)生可逆性改變，從而使腫瘤細胞的惡性度發(fā)生改變或者發(fā)生多重耐藥。而在這些生物介質(zhì)中，就有亞硝酸鹽的存在，基于這樣的爭議，所以研究亞硝酸鹽如何調(diào)控腫瘤細胞的“干性”就顯得尤為重要。
　　目的:本文旨在探討，在腫瘤微環(huán)境中有較高含量，又是細胞關(guān)鍵的調(diào)控因子的亞硝酸鹽是如何影響人肝癌中腫瘤干細胞樣細胞表型的。
　　方法:采用DMEM/F12無血清培養(yǎng)基和超低吸附6孔板，在懸浮的情況下培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細

3、胞，懸浮培養(yǎng)所獲得球形成細胞用于后續(xù)的實驗；流式細胞儀檢測各組細胞的細胞周期分布情況，Hoechst33342染料孵育各組細胞，再用流式細胞儀檢測各組細胞的邊緣群細胞數(shù)量；腫瘤細胞自我更新能力的檢測采用體外克隆形成實驗和超低吸附6孔板細胞球形成實驗；各組不同處理條件的肝癌細胞侵襲能力的檢測采用Transwell細胞侵襲實驗；各組不同處理條件的肝癌細胞的腫瘤干細胞表面標(biāo)志物的表達差異采用流式細胞儀檢測，westen blot實驗結(jié)果用于檢

4、測各組不同處理條件的肝癌細胞的腫瘤干細胞表面標(biāo)志物蛋白的表達量；各組不同處理的肝癌細胞耐藥性采用MTT法檢測各組細胞的活力。
　　結(jié)果:肝癌SMMC-7721細胞通過懸浮培養(yǎng)所獲得的球形成細胞自我更新能力增強，在流式細胞術(shù)檢測腫瘤干細胞標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn)經(jīng)過亞硝酸鈉處理的細胞比未經(jīng)過處理的細胞腫瘤干細胞標(biāo)志物表達量增加了，對化療藥物的耐受能力也明顯增強。這些實驗結(jié)果都提示：我們所獲得的球形成細胞可能富集了數(shù)量比親本細胞多的具有腫瘤干細胞

5、特征的細胞。用亞硝酸鈉（16mg·L-1）處理親本細胞和球形成細胞后，流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示經(jīng)亞硝酸鈉處理的組的G0/G1期細胞比例增加，S期所占的比例減少；邊緣群細胞數(shù)量所占的比例增多；腫瘤癌干細胞標(biāo)志物CD133、CD90和EpCAM的表達量增加；腫瘤細胞對化療藥物的耐受能力和對組織的侵襲能力增強。與親本細胞相比，亞硝酸鹽對球形成細胞的上述作用明顯增強。結(jié)果表明，亞硝酸鹽通過上調(diào)肝癌干細胞“干性”增強肝癌細胞侵襲能力。
　　結(jié)