亞硝酸鈉對SMMC-7721細胞增殖、凋亡、侵襲能力的影響.pdf

1、目的：為了揭示環(huán)境亞硝酸鹽暴露對癌細胞演進的影響，研究亞硝酸鹽對人肝癌細胞增殖、凋亡和侵襲能力的作用，評價環(huán)境亞硝酸鹽暴露與肝癌的關系，為科學制訂食品、飲水亞硝酸鹽健康標準，提供實驗依據(jù)。
　　 方法：用人肝癌SMMC-7721細胞為模型，以亞硝酸鈉代表亞硝酸鹽，以硝酸鈉為對照，體外細胞增殖指標采用MTT細胞增殖活性、細胞計數(shù)、c-fos早期增殖基因；細胞凋亡模型采用氯化鎘和乙醇誘導法，細胞凋亡檢測采用流式細胞術FITC-ann

2、exinⅤ/PI雙染法、Hoechst 33258 熒光單染法、Hoechst 33258/PI活細胞聯(lián)染法；細胞遷移和侵襲能力判定采用劃痕實驗和Transwell侵襲實驗。比色法測定脂質過氧化產(chǎn)物與抗過氧化酶活性；免疫細胞化學法檢測金屬硫蛋白（MT）表達；Western-blotting檢測細胞凋亡相關蛋白表達的變化。
　　 結果：MTT結果顯示，亞硝酸鈉濃度低于800 mg·L-1時，細胞增殖活力呈非線性濃度依賴增殖關系，亞

3、硝酸鈉最小促增殖效應（超過對照組的11％）濃度為17 mg·L-1。用一氧化氮（NO）特異性清除劑羧基-2-苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物（c-PTIO）清除NO后，培養(yǎng)體系中的亞硝酸鹽仍表現(xiàn)出一定的促細胞增殖作用。亞硝酸鈉濃度高于800 mg·L-1時，呈濃度依賴性增殖抑制。
　　 亞硝酸鈉濃度在17-800 mg·L-1時早期增殖基因c-fos表達量和細胞計數(shù)結果也呈現(xiàn)出非線性濃度依賴增加關系。用17 m

4、g·L-1亞硝酸鈉建立亞硝酸鹽短暫或慢性預適應細胞模型，兩種細胞模型在受到氯化鎘或乙醇作用時，與單純氯化鎘或乙醇組細胞相比增殖活力升高，細胞凋亡減少；同時細胞丙二醛（MDA）含量下降，超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性升高，金屬硫蛋白（MT）表達增強；Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達量降低，Bcl-2蛋白表達量升高，細胞缺氧誘導因子-1（hypoxia-inducible factor，HIF-1α

5、）表達量升高；低于800 mg·L-1的亞硝酸鈉還可以明顯誘導HIF-1α表達增強，加入一氧化氮清除劑c-PTIO，細胞HIF-1α表達雖有所減少，但在一定濃度范圍內(nèi)，仍然促進細胞HIF-1α表達增強；17 mg·L-1亞硝酸鈉體外作用人肝癌SMMC-7721細胞24 h，可以使細胞劃痕愈合的相對距離增大；亞硝酸鈉孵育細胞48h后，培養(yǎng)液上清誘導24 h，可以使穿過人工基底膜的細胞數(shù)增多。
　　 結論：
　　 1.低劑