對(duì)坐葉的活性成分及質(zhì)量控制研究.pdf

1、對(duì)坐葉是茜草科耳草屬(Hedyotis)植物長(zhǎng)節(jié)耳草(Hedyotis uncinella Hook. et Arn.)的干燥全草，是貴州省的少數(shù)民族用藥，產(chǎn)于海南、廣東、湖南、貴州、臺(tái)灣和香港等地，國(guó)外分布于印度。對(duì)坐葉被廣泛用于治療癌腫、風(fēng)濕、痢疾、腹瀉、毒蛇咬傷和肝炎等疾病。對(duì)坐葉具有很高的藥用價(jià)值，目前已經(jīng)被開(kāi)發(fā)為中成藥上市。貴州百花醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)的解毒止瀉片是對(duì)坐葉單方制劑，該藥具有清熱解毒、利濕止瀉的功效，用于胃腸濕熱

2、所導(dǎo)致的腹瀉、腹脹、腹痛、急性腸炎等。另外，貴州家誠(chéng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的解毒止瀉膠囊也是以對(duì)坐葉為原料的單方制劑。
　　對(duì)坐葉的質(zhì)量直接關(guān)系到解毒止瀉片的臨床療效與安全。然而，到目前為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)于對(duì)坐葉的化學(xué)成分研究尚不足，對(duì)于藥材以及其化學(xué)成分的藥理活性研究更為欠缺。對(duì)坐葉藥材缺乏簡(jiǎn)便準(zhǔn)確可靠的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，僅2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》收載對(duì)坐葉，以齊墩果酸作為指標(biāo)性成分，采用薄層掃描色譜的方法進(jìn)行含量測(cè)定。因

3、此，本課題的意義在于，在明確對(duì)坐葉活性成分的基礎(chǔ)上，找出對(duì)坐葉藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)性成分，采用HPLC修訂對(duì)坐葉的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，制定可靠準(zhǔn)確簡(jiǎn)便的質(zhì)量控制方法，為對(duì)坐葉藥材及其單方制劑的質(zhì)量控制提供依據(jù)。
　　本課題采用多種分離純化方法，如硅膠薄層色譜、凝膠色譜、MCI、制備高效液相色譜、制備 TLC等，對(duì)對(duì)坐葉的二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)分離，得到純度較高的單體化合物。通過(guò)多種現(xiàn)代光譜聯(lián)用技術(shù)，比如1H-NMR譜、1

4、3C-NMR譜、DEPT譜、二維譜、圓二色譜、旋光色譜、IR等，對(duì)分離得到的單體進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　從對(duì)坐葉中分離得到41個(gè)化合物，其中10個(gè)木質(zhì)素類化合物，12個(gè)芳香類化合物，4個(gè)香豆素類化合物，3個(gè)三萜及甾體類化合物，12個(gè)其他類化合物。其中，DZY-9和 DZY-10為新化合物，屬于木質(zhì)素類化合物。除了DZY-27~DZY-29，其他化合物均為首次從對(duì)坐葉中分離。
　　本課題考察了37個(gè)單體化合物對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的人宮

5、頸癌細(xì)胞株Hela細(xì)胞NF-κB表達(dá)的抑制活性，結(jié)果顯示DZY-9((7R,8S)-balanophonin)、DZY-27(ursolic acid)和DZY-28(oleanolic acid)對(duì)NF-κB表達(dá)有一定的抑制活性，且呈濃度依賴關(guān)系。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DZY-9((7R,8S)-balanophonin)、DZY-27(ursolic acid)和DZY-28(oleanolic acid)對(duì)NF-κB的抑制活性不是由化

6、合物的毒性引起的。
　　本課題還考察了37個(gè)單體化合物的抗菌活性，依據(jù)CLSI(美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì))操作規(guī)程，采用肉湯稀釋法，選用鴨疫里默氏桿菌(Riemerella anatipestifer CI1410)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus CI0809)、豬鏈球菌(Streptococcus suis CI1407)、大腸桿菌(Escherichia coli CI1401)、銅綠假單胞菌(P

7、seudomonas aeruginosa CI1011)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila CI1004)、沙門氏菌(Salmonella gallinarum CI0812)、無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae CI1302)、副溶血弧菌(Vibrio Parahemolyticus CI1456)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis CI11

8、12)和糞腸球菌(Enterococcus faecalis CI1102)，以環(huán)丙沙星為對(duì)照物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DZY-19對(duì)嗜水氣單胞菌(A.hydrophila CI1004)有明顯的抗菌活性，DZY-33對(duì)鴨疫里默氏桿菌(R.anatipestifer CI1410)有明顯的抗菌活性。
　　本課題對(duì)對(duì)坐葉進(jìn)行了質(zhì)量控制研究，以齊墩果酸和熊果酸作為對(duì)坐葉的指標(biāo)性成分，采用HPLC對(duì)其進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)考察，