糖尿病腎病炎癥因子的表達及黃芪甲苷的腎臟保護作用.pdf

1、目的:
　　1、探討中醫(yī)藥治療糖尿病腎病的用藥特點;
　　2、觀察氣陰兩虛挾瘀證糖尿病腎病患者血清CXCL12等炎癥因子的表達情況;
　　3、觀察黃芪甲苷對2型糖尿病db/db小鼠的腎臟保護作用。
　　方法:
　　1、文獻研究
　　采用文本挖掘的方法，探索中醫(yī)治療糖尿病腎病的的用藥特點。通過參考《中藥大辭典》（第二版）、《中華人民共和國藥典》（增補版）及全國高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材《中藥學》（第二版）建

2、立詞表庫。登錄中國知網(wǎng)(CNKI)，對中醫(yī)治療糖尿病腎病理論研究、經(jīng)驗總結(jié)、臨床試驗相關(guān)文獻進行搜索。將搜索到的文獻按程序進行篩選并轉(zhuǎn)換格式后建立數(shù)據(jù)庫，以該詞表庫作為關(guān)鍵詞苦對相關(guān)文獻中的關(guān)鍵詞進行提取并保存。采用Cytoscape軟件對提取到的關(guān)鍵詞進行網(wǎng)絡(luò)分析，總結(jié)其用藥特點。
　　2、臨床觀察
　　參考相關(guān)文獻建立診斷及納排標準，對2015年3月至2016年1月在廣州中醫(yī)藥大學附屬深圳市中醫(yī)院門診及住院就診的糖尿病腎

3、病患者進行篩選，納入符合標準的氣陰兩虛挾瘀型糖尿病腎病患者進行觀察。觀察內(nèi)容包括一般資料、生化指標水平及相關(guān)炎癥因子的表達。
　　3、動物實驗
　　基于以上兩項研究的結(jié)果，采用中藥黃芪提取物黃芪甲苷對2型糖尿病db/db小鼠進行治療。用藥期間，應(yīng)用代謝籠、血糖儀和動物無創(chuàng)血壓計測量小鼠的代謝指標、血糖和血壓。治療12周后殺檢小鼠，留取血液和尿液。應(yīng)用全自動生化分析儀檢測小鼠腎功能、血白蛋白等生化指標;應(yīng)用ELISA檢測小鼠尿

4、白蛋白排泄率和腎小管損傷指標;應(yīng)用PAS染色劑透射電鏡檢測腎小球和腎小管病理和超微病理損傷;采用免疫印跡法(Western Blot)檢測腎臟內(nèi)P-Akt和P-NF-κB蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1、文獻研究
　　通過制定檢索式，檢索CNKI糖尿病腎病相關(guān)文獻，共獲得中醫(yī)治療糖尿病腎病理論研究、經(jīng)驗總結(jié)及臨床試驗相關(guān)文獻共3778篇。根據(jù)篩選標準，經(jīng)篩選后得到目標文獻理論研究文獻58篇，經(jīng)驗總結(jié)文獻264篇，臨床試驗

5、文獻618篇。將這些文獻轉(zhuǎn)換格式后進行關(guān)鍵詞提取，得到關(guān)鍵的一維頻次及二維頻次結(jié)果，并利用Cytoscape軟件對提取結(jié)果進行網(wǎng)絡(luò)關(guān)系分析。在理論研究文獻中，使用頻次處于前三位的中藥方劑為腎氣丸、生脈散、金匱腎氣丸，使用頻次處于前三位的中藥為黃芪、丹參、茯苓。網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)理論研究中，黃芪、丹參處于整體用藥的核心位置，與其他藥物連系最多。經(jīng)驗總結(jié)文獻中方劑應(yīng)用居于前三位的是真武湯、六味地黃丸、五苓散，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)真武湯與前十位中其

6、他方劑幾乎均存在連系，而濟生腎氣丸、金匱腎氣丸、六味地黃丸、生脈散關(guān)系密切，而其他方劑相對獨立。單味中藥挖掘結(jié)果前三位是黃芪、丹參、地黃，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪、地黃位于藥物應(yīng)用的中心位置。臨床試驗文獻中方劑挖掘結(jié)果前三位分別為六味地黃丸、補陽還五湯、真武湯，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果金匱腎氣丸、六味地黃丸處于核心位置。單位中藥挖掘結(jié)果前三位為黃芪、丹參、地黃，網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪仍然處于用藥的核心位置。
　　2、臨床觀察
　　研究共納入2

7、015年3月至2016年1月在廣州中醫(yī)藥大學附屬深圳市中醫(yī)院門診及住院病例共80例，并納入在體檢門診的21例健康人群作為對照組。所有納入病例分為正常組（N組）21例、糖尿病組（DM組）19例、糖尿病腎病1-2期組(DKD1-2組)19例、糖尿病腎病3期組（DKD3組）20例、糖尿病腎病4期組（DKD4組）21例、糖尿病腎病5期組（DKD5組）21例。各組病例在年齡、性別、體重等基礎(chǔ)資料上差異無統(tǒng)計學意義。但BMI、血壓、血糖及糖化血紅蛋

8、白指數(shù)方面N組明顯低于DN各組。腎功方面，SCr由N組至DN5組患者逐漸升高，BUN含量DN4、5組含量最高，GFR水平在DKD早期升高，后期逐漸下降，末期時將至最低。脂代謝方面除HDL外，各組結(jié)果較為一致，N組的HDL水平明顯高于其他各組。CXCL12檢測結(jié)果，N組與DKD5組含量最高，DM組含量最低，且與N組差異具有統(tǒng)計學意義。MCP-1在DKD4、5組含量最高，且與N組比較差異具有統(tǒng)計學意義。TGF-β1檢測結(jié)果顯示DKD各組均高

9、于N組。CRP記過顯示，N組與DKD5組含量最低，而其他DKD各組與N組差異均具有統(tǒng)計學意義。
　　3、動物實驗
　　動物實驗將db/db小鼠隨機分為模型組和治療組，每組8只，治療組采用黃芪甲苷給藥，持續(xù)12周。8只db/m小鼠作為對照組。模型組與治療組體重明顯高于正常組，且模型組體重增加快于治療組。實驗結(jié)束時，模型組血壓低于正常組，而治療組血壓明顯升高，且明顯高于模型組，其差異具有統(tǒng)計學意義。治療組心率降低，與模型組相比其

10、差異具有統(tǒng)計學意義。模型組、治療組小鼠左、右腎重高于正常值，模型組與正常組差異具有統(tǒng)計學意義，而與治療組相比差異無統(tǒng)計學意義。
　　在血糖及糖化血紅蛋白方面，模型組與治療組都遠高于正常組，但治療組與模型組差異無統(tǒng)計學意義。小鼠UAE方面，模型組、治療組均高于正常組。治療組尿白蛋白含量一直低于模型組，且在第8、12周時與模型組相比，兩者差異具有統(tǒng)計學意義。
　　生化指標方面，除SCr、TG、LDL外，其余各項指標模型組均高于正

11、常組，且差異具有統(tǒng)計學意義。而治療組除TC、HDL外，其余各項結(jié)果與模型組相比，差異均具有統(tǒng)計學意義。
　　病理改變方面，模型組小鼠腎小球、腎小管肥大，F(xiàn)PW增加、GBM和TBM增厚，與正常組相比其差異均具有統(tǒng)計學意義。治療組可減低腎小球、腎小管面積，抑制GBM、TBM增厚。足突寬度方面，模型組最高，與正常組比較，遠高于正常組。治療組低于模型組，與模型組差異有統(tǒng)計學意義。
　　通路蛋白方面，p-Akt結(jié)果顯示模型組與正常組、

12、治療組比較其差異具有統(tǒng)計學意義。p-NF-κB p65的表達結(jié)果與p-Akt一致。
　　ELISA方面，db/db模型組尿中TGF-β1表達遠高于正常組，其與治療組差異具有統(tǒng)計學意義。小鼠腎臟TGF-β1治療組遠低于正常組和模型組，且差異具有統(tǒng)計學意義。NGAL結(jié)果顯示，模型組小鼠中含量最高，治療組低于模型組，其差異具有統(tǒng)計學意義。KIM-1結(jié)果模型組高于治療組，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　1、中藥黃芪是中醫(yī)