2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、癲癇(Epilepsy)是由多種原因引起的腦部神經(jīng)元陣發(fā)性異常放電所致的非傳染性神經(jīng)疾病,影響著數(shù)以百萬計(jì)人們的日常生活。癲癇的發(fā)生通常是由于大量神經(jīng)元突然異常放電導(dǎo)致大腦神經(jīng)元興奮性失調(diào),因此,癲癇的發(fā)生通常與大腦內(nèi)的信號(hào)傳遞有關(guān)。大腦中的信號(hào)傳遞方式包括電傳導(dǎo)和化學(xué)傳導(dǎo),化學(xué)傳導(dǎo)通常在細(xì)胞膜之間進(jìn)行,通過囊泡或離子通道進(jìn)行化學(xué)物質(zhì)的傳遞,達(dá)到傳遞興奮或抑制的目的。因此癲癇的機(jī)制研究常常與傳遞信號(hào)的跨膜區(qū)域有密切的關(guān)系。早有研究通過生

2、物信息學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)Tmem235編碼的跨膜蛋白與鈣離子通道存在同源關(guān)系,與此同時(shí),通過基因芯片篩選到Tmem235基因在癲癇疾病中可能有所改變,因此Tmem235可能參與了癲癇疾病的發(fā)生和機(jī)制。
  本研究首先通過RT-PCR得到帶酶切位點(diǎn)的Tmem235抗原決定簇的雙鏈DNA,接著對(duì)回收到的Tmem235和pet32a進(jìn)行雙酶切,將酶切成功的Tmem235和pet32a片段連接,連接成功后轉(zhuǎn)化,通過凝膠電泳初步挑選陽性克隆,再送

3、去測(cè)序,通過VECTOR NT比對(duì)確定為正確的Tmem235和pet32a的連接序列。將正確的連接序列培養(yǎng)擴(kuò)增然后經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)得到大量的Tmem235蛋白,將誘導(dǎo)后的蛋白進(jìn)行超聲破碎,然后通過Tricine-SDS-PAGE確定蛋白的表達(dá)位置,最后以Tricine-SDS-PAGE膠分離得到純化的Tmem235,免疫兔子得到Tmem235的抗體。首先利用PCR和Western Blot對(duì)大鼠的不同組織的Tmem235進(jìn)行半定量實(shí)

4、驗(yàn),分析Tmem235的組織特異性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Tmem235在肝、脾中有微量表達(dá),在腦組織中的表達(dá)較為豐富。接著,我們通過持續(xù)每天注射戊四唑建立起穩(wěn)定的癲癇點(diǎn)燃模型,分別提取癲癇動(dòng)物模型和正常大鼠的海馬和皮層的RNA和蛋白質(zhì),通過PCR和Western Blot對(duì)其進(jìn)行mRNA和蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)分析。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),癲癇動(dòng)物模型的皮層在mRNA和蛋白質(zhì)水平上的表達(dá)均較正常鼠上調(diào)。Tmem235在癲癇動(dòng)物中的差異表達(dá)對(duì)我們研究癲癇疾病的病理原

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