Neurofibromin在癲癇動(dòng)物模型中的表達(dá)及功能.pdf

1、第一部分Neurofibromin在癲癇動(dòng)物模型中的表達(dá)
　　目的：研究Neurofibromin在匹魯卡品癲癇模型大鼠腦組織的時(shí)空變化規(guī)律，從而探討與癲癇的相關(guān)性。
　　方法：
　　1、將64只雄性成年的SD大鼠隨機(jī)地分為8個(gè)組:7個(gè)實(shí)驗(yàn)組（各組n=8）和1個(gè)正常對(duì)照組（n=8）。7個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為6小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)、7天、14天、30天、60天。將7個(gè)實(shí)驗(yàn)組的所有大鼠構(gòu)建成氯化鋰-匹羅卡品點(diǎn)燃的顳葉癲癇模型<

2、br>　　2、分別采用免疫組化，免疫熒光及Western blot技術(shù)檢測(cè)Neurofibromin在氯化鋰-匹魯卡品模型大鼠海馬及皮質(zhì)中表達(dá)的時(shí)間及空間的變化規(guī)律。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化結(jié)果顯示Neurofibromin在神經(jīng)元胞漿表達(dá)，主要在海馬DG區(qū)、CA1、CA2及CA3區(qū)和皮質(zhì)表達(dá)。與對(duì)照組相比，可以觀察到實(shí)驗(yàn)組在點(diǎn)燃后6小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)、1周、2周、1月、2月表達(dá)逐漸增高，其中有顯著差異從1周（P

3、<0.05）開始，在海馬組織中表達(dá)在2月時(shí)達(dá)高峰，在皮質(zhì)1月達(dá)高峰，在2月時(shí)較1月稍低。
　　2、免疫熒光結(jié)果顯示Neurofibromin在點(diǎn)燃后大鼠海馬及皮質(zhì)神經(jīng)元上表達(dá)，而不與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞共表達(dá)。
　　3、Western blot結(jié)果顯示Neurofibromin在點(diǎn)燃后大鼠海馬及皮質(zhì)中1周時(shí)升高具有顯著差異（P<0.05），之后逐漸升高，在海馬組織中高峰在2月，而皮質(zhì)中高峰在1月，其表達(dá)規(guī)律與免疫組化所觀察到的結(jié)果一

4、致。
　　結(jié)論：Neurofibromin在癲癇模型大鼠腦組織中神經(jīng)元表達(dá)，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)增加，在海馬及皮質(zhì)均從1周時(shí)表達(dá)升高具有顯著差異，在海馬中2月達(dá)高峰，在皮質(zhì)1月達(dá)高峰，提示Neurofibromin可能參與癲癇的發(fā)生發(fā)展。
　　第二部分Neurofibromin在癲癇動(dòng)物模型癇性發(fā)作中的功能
　　目的：探討Neurofibromin在匹魯卡品癲癇模型大鼠癇性發(fā)作中的功能。
　　方法：
　　1、選

5、取雄性成年SD大鼠32只，隨機(jī)分成4個(gè)實(shí)驗(yàn)組（各組n=8）：正常對(duì)照組、生理鹽水組、空載體組、siRNA組。對(duì)生理鹽水組、空載體組及siRNA組的大鼠海馬區(qū)分別注射生理鹽水、空載體、Neurofibromin干擾病毒，注射藥物7天后將4個(gè)組的所有大鼠腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品，然后觀察各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期、持續(xù)時(shí)間及發(fā)作頻率變化。
　　2、采用Western blot技術(shù)檢測(cè)上述大鼠7天時(shí)海馬區(qū)Neurofibromin表達(dá)量變

6、化。
　　結(jié)果：
　　1、各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期變化：對(duì)各組大鼠癇性發(fā)作的潛伏期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后結(jié)果為：正常對(duì)照組為（20.29±4.23）min、生理鹽水組為（19.25±5.55）min、空載體組為（18.62±6.38） min、siRNA組為（29.00±5.35）min。siRNA組的潛伏期比其他三組明顯延長，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組的潛伏期無顯著差異。
　　2、各組大鼠癇性發(fā)作的頻率變化：統(tǒng)計(jì)

7、各組大鼠腹腔注射氯化鋰-匹羅卡品后2小時(shí)內(nèi)發(fā)作次數(shù)為：正常對(duì)照組為16.63次、生理鹽水組為16.79次、空載體組為17.92次、siRNA組為6.86次。siRNA組的發(fā)作頻率較其他三組明顯縮短，差異具有限制性（P<0.05），而其他三組發(fā)作頻率無顯著差異。
　　3、各組大鼠癇性發(fā)作的持續(xù)時(shí)間變化：對(duì)各組大鼠癇性發(fā)（Racine評(píng)分為4級(jí)及以上）的持續(xù)時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)后結(jié)果為：正常對(duì)照組為（22.00±4.69）min、生理鹽水組為

8、（24.29±4.42）min、空載體組為（22.50±3.78） min、siRNA組為（16.29±2.29） min。siRNA組的持續(xù)時(shí)間較其他三組明顯縮短，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組無顯著差異。
　　4、Western blot結(jié)果顯示在注射藥物7天Neurofibromin在siRNA組蛋白表達(dá)量較其他三組明顯降低，差異具有顯著性（P<0.05），而其他三組蛋白表達(dá)量無顯著差異。
　　結(jié)論：siR