Toll受體在急性輪狀病毒腸炎乳鼠動物模型中的表達研究.pdf

1、研究背景：
　　輪狀病毒(Rotavirus,RV)是引起世界范圍內(nèi)嬰幼兒嚴重脫水性腹瀉的主要病原體,每年約50-60萬兒童因感染輪狀病毒死亡。腸粘膜是防止病原微生物進入機體的第一道屏障,病毒等病原菌感染腸上皮后,天然免疫防御系統(tǒng)立即被激活,導致I、III型干擾素(IFNs)和其它細胞因子瀑鏈式釋放,抑制其在腸上皮上的復制。
　　目的：
　　本課題通過建立輪狀病毒腸炎動物模型,檢測急性輪狀病毒腸炎中乳鼠小腸粘膜Toll

2、受體(TLRs)的mRNA表達水平,探討乳鼠RV感染后天然免疫應答特點,為建立輪狀病毒感染有效預防和治療的方法提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　實驗選用70只昆明乳鼠,共4窩,隨母鼠按窩隨機分為2組:RV感染組(34只)和正常對照組(36只),經(jīng)灌胃感染建立RV乳鼠腹瀉模型。觀察各組乳鼠的臨床癥狀、生長發(fā)育情況。輪狀病毒感染后第3d和6d分別處死各組乳鼠(RV感染組12只,正常對照組15只),無菌操作下留取小腸標本,RV感染組

3、另外6只乳鼠繼續(xù)觀察臨床癥狀。光鏡觀察小腸組織病理學改變;采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測乳鼠小腸TLRs、IFN-γmRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.RV攻擊后乳鼠的臨床癥狀:實驗組昆明乳鼠在感染RV24h后相繼出現(xiàn)腹瀉癥狀,表現(xiàn)為糞便含水量增多(黃色糊狀便或黃色水樣便)、腹脹、精神欠佳、活動量少、皮膚有皺褶,同時體重不增。第3-4天出現(xiàn)腹瀉高峰,但未出現(xiàn)典型的水樣便,第10天完全恢復正常,10天后體重開始增

4、長,速率同對照組。實驗過程中實驗組有4只乳鼠死亡。正常對照組無腹瀉癥狀,精神、活動良好,皮膚光澤。體重增長良好,每天平均增長0.2g。
　　2.小腸組織光鏡下形態(tài)變化:RV感染組突出的病理改變?yōu)槟c上皮細胞明顯腫脹,可見空泡樣變性,少許炎癥細胞浸潤,而增生、壞死、絨毛萎縮脫落改變不明顯,隱窩細胞未見改變,而對照組未見任何病理改變。
　　3.RV感染后3d、6d后乳鼠小腸粘膜TLR2～9、IFN-γmRNA的表達水平:實驗結(jié)果顯

5、示,與正常對照組比較,起病在3d以內(nèi)的輪狀病毒腸炎乳鼠小腸粘膜TLR2,4,7,8,9,IFN-γmRNA表達水平降低,但均沒有統(tǒng)計學意義(p大于0.05),TLR3表達增高,沒有統(tǒng)計學意義(p大于0.05);在感染6d后,與正常對照組比較,RV感染組腸粘膜粘膜TLR2,3,4,7,8,9,IFN-γmRNA表達水平均降低,但都沒有統(tǒng)計學意義(p大于0.05);與發(fā)病3d比較,感染6d后RV感染組、正常組腸粘膜粘膜TLR2,3,4,7,