乳鼠輪狀病毒感染腸道外損害及CpG ODN干預(yù)的保護作用初探.pdf

1、目的：探討人輪狀病毒(HumanRotavirusHRV)感染對乳鼠腸道外心、肝、肺等組織的損傷情況，通過CpGODN干預(yù)實驗，尋找防治RV腸道外感染的新方法。 方法： 1.細(xì)胞培養(yǎng)、病毒增殖和病毒感染滴度測定。 2.乳鼠腸道外組織HRV感染選用24只ICR乳鼠，在實驗條件下，隨機分為3組正常對照組(A組)8只，腹腔注射HRV組(B組)8只，CpGODN預(yù)處理組(C組)8只，A組正常喂養(yǎng)，B組第4天腹腔注射牛理鹽

2、水(NS)0.04ml一劑，C組出生后開始即腹腔注射小劑量CpGODN(50μg)連續(xù)3天，第4天用HRV腹腔注射B、C組一劑感染乳鼠。于第7天處死各組乳鼠，留取心、肝、肺標(biāo)本；光鏡下觀察心、肝、肺組織病理學(xué)改變；電鏡觀察心、肝、肺組織超微結(jié)構(gòu)的改變；比較各組乳鼠腸道外臟器損傷的情況。采用逆轉(zhuǎn)錄PCR方法檢測HRVVP7RNA片段了解心、肝、肺組織輪狀病毒RNA(RV-RNA)復(fù)制情況。 結(jié)果： 1.光鏡下：腹腔注射HR

3、V組(B組)、心肌組織，肝組織，肺組織有不同程度的病理改變；CpGODN預(yù)處理組(C組)各組織的病變相對較輕，正常對照組(A組)乳鼠上述器官未見明顯改變。 2.電鏡下心、肝、肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化： 2.1腹腔注射HRV組(B組)，心肌局部肌絲排列稀疏，肌膜下有水腫，心肌細(xì)胞內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤，大部分心肌細(xì)胞核位于細(xì)胞中間、固縮，核膜間隙擴大，周邊內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，并在心肌細(xì)胞核旁邊發(fā)現(xiàn)RV顆粒。肝臟組織超微結(jié)構(gòu)的變化表現(xiàn)為，多數(shù)肝

4、細(xì)胞核固縮-崩解現(xiàn)象，細(xì)胞內(nèi)較多空泡變性，微絨毛脫落，肝細(xì)胞線粒體腫脹局限性空泡形成(凝集)常見，炎癥細(xì)胞浸潤細(xì)胞間隙(狄氏間隙)，以淋巴細(xì)胞為主，部分柯否氏細(xì)胞浸潤，淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞緊密接觸浸入肝細(xì)胞內(nèi)，攻擊肝細(xì)胞現(xiàn)象。肝細(xì)胞內(nèi)大量的脂質(zhì)顆粒沉積。部分肝細(xì)胞毛細(xì)膽管明顯擴張，膽汁淤積，肝細(xì)胞膽色素顆粒沉積。肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化表現(xiàn)為，肺泡腔中較多巨噬細(xì)胞浸潤，淋巴細(xì)胞浸潤，細(xì)胞核輕度固縮，肺泡板狀小體增大，數(shù)量顯著減少，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)

5、胞線粒體有較多空泡形成，可見有脫落細(xì)胞。 2.2CpGODN預(yù)處理組(C組)，心肌細(xì)胞線粒體局限性空泡形成，細(xì)胞核固縮不明顯。肝臟組織超微結(jié)構(gòu)的變化表現(xiàn)為，肝細(xì)胞局灶性溶解(胞質(zhì)溶解)，胞內(nèi)少量空泡形成，肝細(xì)胞內(nèi)部分粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，線粒體腫脹不著。肺組織超微結(jié)構(gòu)的變化表現(xiàn)為，Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞線粒體稍有腫脹，少量空泡形成，肺泡板狀小體稍有減少，肺泡毛細(xì)血管腔中少量中性粒細(xì)胞附壁。 2.3正常對照組(A組)，各組織的超微結(jié)構(gòu)

6、正常。 3.RT-PCR結(jié)果：HRV腹腔注射組(B組)肝、心臟組織HRVVP7RNA表達(dá)呈陽性，CpGODN預(yù)處理組(C組)肝、心臟呈弱陽性，半定量分析組間比較有顯著性差異(P＜0.01)，兩組的肺組織呈陰性表達(dá)；正常對照組(A組)各組均陰性。 結(jié)論： 1.腹腔注射HRV可使ICR乳鼠的心、肝、肺臟組織產(chǎn)生病變，其中以心臟及肝臟組織的損害較為明顯，提示心及肝臟可能是HRV的易感組織之一，HRV感染對肺的損害相對較