輪狀病毒致乳鼠感染后IFN-γ-IL-17水平及腸道外損傷的研究.pdf

1、目的:建立BALB/c乳鼠腸道感染輪狀病毒(Rotavirus,RV)的動物模型，檢測血Th1細胞因子(IFN-γ）和Th17細胞因子（IL-17）的水平，動態(tài)比較兩細胞因子在不同時間點變化的差異性，進一步探討RV感染后機體的細胞免疫過程及相關(guān)細胞因子的關(guān)系，深入了解RV感染的免疫病理特點，為臨床防治RV感染及腸道外損傷尋找新的辦法。
　　方法:以恒河猴胚腎細胞（MA-104）培養(yǎng)猴RV SA-11株，擴增，組織細胞半數(shù)感染量（T

2、CID50）法測定病毒滴度，分裝，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩嶒瀯游镞x用清潔級BALB/c乳鼠60只，日齡3-5日，雌雄各半，隨機分為兩組，每組30只，即實驗組（RV感染模型組）:胃內(nèi)灌入100ul（1×10-4）TCD50感染性滴度的SA-11株RV；空白對照組：胃內(nèi)灌入100ul NS。病毒接種后，各組動物隔離飼養(yǎng)。接種當天以第0天計，接種后每天觀察乳鼠的活動情況、有無皮膚脫水、肛門紅腫、腹部鼓脹、體型、飲食情況及大便變化情況等，收集大

3、便經(jīng)膠體金法檢測RV抗原。分別在接種后的第3天和第8天（每組各15只），活體摘除眼球取血各約0.5ml，血標本4000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘留取血清（每個標本血清約50-100ul），經(jīng)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測細胞因子IFN-γ和IL-17水平。處死乳鼠，留取肝臟、心臟等放置福爾馬林內(nèi)固定，蘇木精－伊紅（HE）染色光鏡下觀察形態(tài)學改變。結(jié)果:1、RV SA-11株在MA-104細胞內(nèi)增殖良好，感染后24h即可出現(xiàn)病變，72h病變可達

4、到(+++～++++)，組織細胞半數(shù)感染量法滴定所收集的病毒液，滴度TCID50為10-4。2、實驗組乳鼠表現(xiàn)為食欲不振，活動減少，皮膚干燥、嗜睡、對刺激反應(yīng)差、腹脹、腹瀉癥狀（大便軟、稀薄樣便）等，第3～4天達到頂峰，至第8天精神狀況好轉(zhuǎn)。對照組乳鼠一直保持正常情形，皮膚彈性可，對刺激反應(yīng)靈敏，食欲正常，精神活躍，大便正常。3、感染后第3天實驗組IFN-γ水平明顯高于對照組（P﹤0.01），第8天時水平與正常對照組比較未見顯著差異（P

5、﹥0.05）；感染后第3天實驗組IL-17水平與正常對照組比較未見顯著差異（P﹥0.05），第8天時水平明顯高于對照組（P﹤0.05）。4、光鏡下實驗組乳鼠第3天大部分肝細胞腫脹，中、重度空泡變性，灶狀LC浸潤；心肌細胞濁腫，心肌間質(zhì)水腫，心內(nèi)膜、心肌層LC浸潤，第8天時個別肝臟細胞稍腫脹，輕度空泡變性，心肌細胞大致正常。對照組肝臟及心臟病理未見明顯改變。
　　結(jié)論:BALB/c乳鼠感染RV動物模型建立成功。乳鼠感染RV尤其在早期