CpG ODN對(duì)人輪狀病毒乳鼠腹瀉模型的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的： 探討含CpG基序的寡脫氧核苷酸(CpGoligodeoxynucleotide，CpGODN)干預(yù)對(duì)人輪狀病毒感染(humanrotavirus，HRV)乳鼠的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法： 實(shí)驗(yàn)選用64只ICR乳鼠，共8窩，隨母鼠按窩隨機(jī)均分為4組：正常對(duì)照組(A組)、HRV感染組(B組)、CpGODN預(yù)處理組(c組)、CpGODN治療組(D組)，每組16只乳鼠。B、C、D組經(jīng)口感染建立HRV乳鼠腹瀉模型。C

2、組和D組經(jīng)口灌服CpGODN分別進(jìn)行預(yù)處理和治療。觀察各組乳鼠的臨床反應(yīng)、生長(zhǎng)發(fā)育和排毒情況。HRV攻擊后第4天隨機(jī)處死各組乳鼠8只，留取小腸標(biāo)本，另外8只乳鼠繼續(xù)觀察臨床癥狀。光鏡觀察小腸組織病理學(xué)改變；電鏡觀察小腸組織超微結(jié)構(gòu)改變；采用免疫組化SABC方法進(jìn)行小腸組織Toll樣受體9(Toll-likereceptor9，TLR9)、γ-干擾素(interferon-gamma，IFN-γ)表達(dá)的檢測(cè)。 結(jié)果： 1.

3、HRV攻擊后乳鼠的臨床表現(xiàn)及CpGODN干預(yù)結(jié)果：A組乳鼠主要表現(xiàn)為無(wú)腹瀉，食欲正常，生長(zhǎng)發(fā)育正常；B、C、D組動(dòng)物在病毒感染后第二天開始均出現(xiàn)明顯的輪狀病毒(rotavirus，RV)感染癥狀，主要表現(xiàn)為腹瀉，活動(dòng)減少，體重增長(zhǎng)緩慢等。B組乳鼠的腹瀉天數(shù)、RV抗原陽(yáng)性天數(shù)及重型腹瀉發(fā)病率分別為6.00±0.76天、4.88±0.64天及87.5％；均高于C組(4.25±1.16天，3.25±1.04天，25％)和D組(5.56±1.0

4、1天，3.56±0.72天，25％)(P＜0.05)。C組和D組之間腹瀉嚴(yán)重程度、腹瀉持續(xù)天數(shù)及RV抗原陽(yáng)性天數(shù)沒有顯著差異(P＞0.05)。感染RV后第4天，B組體重(4.08±0.36克)低于A組體重(5.21±1.07克)(P＜0.01)，而C組(4.74±1.06克)、D組(4.38±0.51克)與A組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)；感染RV后第7天，與A組體重(7.73±0.42克)相比，B組體重(6.65±0.86克)明顯減

5、輕(P＜0.01)，C組(6.61±0.79克)、D組(6.53±0.75克)第7天體重減輕(P＜0.05)，而B組、C組、D組體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。 2.小腸組織光鏡觀察結(jié)果：光鏡下組織形態(tài)學(xué)檢查A組乳鼠小腸絨毛光整、平滑，固有層無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腸腔無(wú)滲出物；B組可見小腸絨毛固有層充血明顯，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腸絨毛變平，萎縮，脫落，腸腔有滲出物；C組、D組小腸絨毛固有層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，小腸絨毛基本完整，部分脫落，腸腔有

6、少量滲出物。 3.小腸組織電鏡觀察結(jié)果：A組乳鼠腸絨毛長(zhǎng)短一致，排列致密整齊；B組微絨毛變短，稀疏，腫脹，密度不均一，部分脫落；細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大量空泡，部分空泡融合，細(xì)胞核固縮，線粒體腫脹，間質(zhì)水腫；固有層嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)明顯；C組、D組絨毛整齊致密，偶見微絨毛紊亂，細(xì)胞內(nèi)空泡明顯減少，間質(zhì)未見水腫及嗜酸細(xì)胞浸潤(rùn)；D組固有層見漿細(xì)胞增生。 4.小腸組織TLR9免疫組化結(jié)果：乳鼠小腸組織切片免疫組化顯示TLR9在4組小腸上皮細(xì)胞中

7、均有表達(dá)，陽(yáng)性者胞漿和胞膜均呈棕黃色；A組、B組平均吸光度值(分別為68.94±37.18，81.76±26.44)無(wú)明顯差異(P＞0.05)；C組、D組平均吸光度值(分別為168.78±71.49，171.57±117.52)明顯高于A組和B組(P＜0.01)；C組和D組平均吸光度值無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 5.小腸組織IFN-γ免疫組化結(jié)果：乳鼠小腸組織切片免疫組化顯示IFN-γ在4組小腸上皮細(xì)胞中均有表達(dá)，陽(yáng)性胞漿和胞

8、膜均呈棕黃色；A組、B組平均吸光度值(分別為537.37±248.99，444.08±223.32)無(wú)明顯差異(P＞0.05)；C組、D組平均吸光度值(分別為969.34±104.29，982.40±317.03)明顯高于A組和B組(P＜0.01)；C組和D組平均吸光度值無(wú)明顯差異(P＞0.05)。 6.小腸組織TLR-9、IFN-γ免疫組化結(jié)果相關(guān)分析：C組乳鼠小腸組織TLR9、IFN-γ的平均吸光度值存在正相關(guān)(r=0.83

9、5，P＜0.01，n=8)；D組乳鼠小腸組織TLR9、IFN-γ的平均吸光度值存在正相關(guān)(r=0.733，P＜0.05，n=8)。 結(jié)論： 1.HRV感染ICR乳鼠引起明顯腹瀉，大便RV抗原陽(yáng)性，小腸病理及超微結(jié)構(gòu)病變明顯，動(dòng)物模型成功建立。HRV感染ICR乳鼠小腸固有層出現(xiàn)嗜酸細(xì)胞增多現(xiàn)象。 2.CpGODN預(yù)處理和治療能減輕乳鼠腹瀉嚴(yán)重程度，縮短腹瀉持續(xù)天數(shù)及大便RV抗原陽(yáng)性天數(shù)，同時(shí)減輕小腸組織機(jī)械屏障的損