GLP-1類似物對多囊卵巢綜合征大鼠卵巢PI3K-AKT-FoxO1信號通路的影響研究.pdf

1、背景與目的:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是育齡婦女常見的內(nèi)分泌紊亂疾病，臨床表現(xiàn)為排卵障礙、高雄激素水平、卵巢多囊樣改變、胰島素抵抗等特征，臨床上主要從促排卵、降低雄激素、改善胰島素抵抗等方面治療，但能兼顧生殖激素紊亂和糖代謝紊亂的治療仍在探索中。GLP-1類似物在2型糖尿病或胰島素抵抗相關(guān)的代謝性疾病的治療有顯著療效，在PCOS的治療處于探索階段。已有的少量臨床研究發(fā)現(xiàn)利拉魯肽對PCO

2、S有一定的治療效果，但其機制尚不清楚。PI3K/AKT/FoxO1通路是與糖代謝密切相關(guān)的胰島素信號通路，其中FoxO1在卵巢中可參與顆粒細胞的凋亡進程。本研究擬通過來曲唑灌胃建立PCOS大鼠模型，并用利拉魯肽進行干預，探討利拉魯肽對于PCOS大鼠的干預效果，以及與卵巢PI3K/AKT/FoxO1信號通路的關(guān)系，探討利拉魯肽干預PCOS的可能機制。
　　方法:21日齡Wistar大鼠分為正常對照組及PCOS模型組，PCOS模型組予

3、來曲唑灌胃造模，連續(xù)干預21天并每天進行陰道涂片觀察動情周期變化，造模結(jié)束后所有大鼠眼眶采血檢測血清睪酮及胰島素，行葡萄糖耐量試驗評估血糖及胰島素抵抗程度。然后隨機處死6只PCOS模型組、7只正常對照組大鼠，取卵巢行HE染色判斷卵巢改變。將剩余PCOS大鼠分為利拉魯肽組(皮下注射利拉魯肽0.4mg/kg，qd)、利拉魯肽+PI3K抑制劑LY294002組(皮下注射利拉魯肽0.4mg/kg，qd+腹腔注射LY2940020.3mg/kg，

4、qd)、PCOS模型空白組，PCOS模型空白組與正常對照組不作處理。共干預21天，處死取心臟血檢測血清睪酮、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FPG)，取雙側(cè)卵巢用RT-PCR技術(shù)檢測PI3K、AKT、FoxO1的mRNA水平，以及Western Blot技術(shù)檢測PI3K、AKT、FoxO1、p-AKT、p-FoxO1的蛋白水平。
　　結(jié)果:來曲唑造模21天，PCOS組大鼠失去規(guī)律動情周期

5、，體重明顯比正常對照大鼠增加，卵巢大體觀呈蒼白、多囊改變，HE染色可見包膜下多個囊泡，顆粒細胞減少。PCOS模型大鼠血清睪酮明顯升高，OGTT60min、120min血糖以及0min、30min胰島素均明顯升高，穩(wěn)態(tài)模型計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、OGTT血糖曲線下面積均比對照組顯著升高，修正的β細胞胰島素分泌指數(shù)(MBCI)、胰島素敏感指數(shù)(ISI)比對照組顯著下降。利拉魯肽組大鼠體重、血LH、FPG、FINS、HOMA-I

6、R較PCOS模型組顯著下降，并且有3只大鼠恢復動情周期，卵巢顆粒細胞層數(shù)較PCOS模型組的增多;PI3K抑制劑LY294002組大鼠經(jīng)干預后，大鼠動情周期無明顯變化，仍停留在動情間期，體重、血LH、HOMA-IR較單用利拉魯肽組明顯升高，其余血FSH、T、FPG、FINS較單用利拉魯肽組升高，但無統(tǒng)計學意義。免疫組化發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxO1主要分布在大鼠卵巢組織顆粒細胞胞核。熒光定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCOS模型組大鼠PI3K mRNA較正常

7、對照組顯著下降;利拉魯肽組干預后AKT、FoxO1 mRNA較PCOS組明顯升高;利拉魯肽+LY294002組大鼠AKT mRNA比單用利拉魯肽大鼠顯著降低。Western Blot法檢測卵巢組織發(fā)現(xiàn)，PCOS組p-AKT、p-FoxO1相對正常對照組明顯減少。用GLP-1干預后p-AKT、p-FoxO1蛋白表達較PCOS組顯著升高，而GLP-1加用LY294002組相比單用GLP-1組，其p-AKT及p-FoxO1明顯下降(P＜0.0

8、5)，與PCOS組無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:來曲唑灌胃法構(gòu)建的PCOS大鼠在不規(guī)律排卵、高睪酮、高LH、卵巢多囊樣改變的基礎(chǔ)上，存在胰島素抵抗、高胰島素血癥、2相分泌下降的特征。應用利拉魯肽干預后可部分恢復動情周期、降低血清LH、降低FPG、FINS及改善胰島素抵抗，并通過PI3K抑制劑LY294002的干預實驗證實了利拉魯肽通過激活卵巢PI3K/AKT/FoxO1信號通路起上述作用。本課題首次對利拉魯肽干預PCOS