Wnt信號通路與AECOPD患者肺功能變化關(guān)系探討及苗藥干預(yù)的研究.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　1、通過對慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronicobstructive pulmonary diseases，AECOPD)患者肺功能分級與Wnt信號通路中β-catenin、RhoA、Wnt5a基因的表達量的相關(guān)性分析，探討Wnt信號通路在COPD氣道重建的作用。
　　2、運用苗藥干預(yù)Wnt信號通路來探討其作用機制。
　　實驗方法：
　　一、臨床實

2、驗選取AECOPD患者80人，按照肺功能分為GOLD1-4組，每組各20人，同時選取20人為實驗對照組，所有人抽血采用RT-PCR檢測β-catenin、RhoA、Wnt5a基因的表達量。
　　二、動物實驗：
　　1、將120只SD雄性大鼠隨機分為正常組和COPD組。采用煙熏聯(lián)合氣管內(nèi)注射脂多糖進行造模后再為COPD空白組、苗藥低、中、高以及地米組。
　　2、取完整右肺中葉用于免疫組織化學(xué)半定量積分法，觀察COPD大鼠

3、肺組織中β-catenin、RhoA、Wnt5a蛋白分布積分情況。采用組織塊貼壁法行成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)后用免疫蛋白印跡法(Western Blot，WB)檢測各組氣道成纖維細(xì)胞中β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白含量。實時熒光定量PCR(Real-Time fluorescencequantItative PCR，RT-PCR)檢測各組氣道成纖維細(xì)胞中β-catenin、Wnt5a、RhoAmRNA表達量。酶聯(lián)免疫法(ELISA

4、)法檢測各組成纖維細(xì)胞上清液TGF-β1、PDGF、MMP-9的表達量。
　　3、探討藥物干預(yù)后β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白的分布、mRNA的表達情況、TGF-β1、PDGF、MMP-9分泌情況以及二者之間的相關(guān)性。
　　數(shù)據(jù)處理：
　　依據(jù)數(shù)據(jù)資料的各自屬性對各組數(shù)據(jù)運用SPSS16.0進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料比較運用x2檢驗。計量資料符合正態(tài)性分布運用One-Way ANOVA;計量資料不符合正態(tài)分

5、布及等級資料采用秩和檢驗。運用Sperman或Pearson進行相關(guān)性分析。
　　實驗結(jié)果：
　　一、臨床實驗
　　1、同正常人相比，β-catenin、RhoA、Wnt5a基因表達量在AECOPD患者中均表達增加，且隨著肺功能分級增加有表達量增加的趨勢，但GOLD3級與GOLDD4級沒有差異。
　　2、β-catenin、Wnt5a、RhoA基因的表達量與FVC％、FEV1％、FEV1/FVC％均存在負(fù)相關(guān)。<

6、br>　　二、動物實驗
　　1、COPD大鼠成纖維細(xì)胞中Wnt信號通路三條途徑中Wnt5a、RhoA、β-cateninmRNA、蛋白表達量較正常組比較增加，其下游的MMP-9、PDGF、TGF-β1也較正常組增加，且兩者呈正比例關(guān)系。
　　2、苗藥紫金牛、鐵掃帚與糖皮質(zhì)激素均具有抑制PDGF、TGF-β1、MMP-9炎癥因子的作用，其中MMP-9、TGF-β1以苗藥中最明顯;PDGF以苗藥高最明顯。
　　3、苗藥對W

7、nt信號通路中的三條途徑均具有作用，但苗藥高對Wnt/β-catenin途徑、Wnt/pcp途徑抑制最明顯。對Wnt/Ca2途徑的抑制以苗藥中、高比較明顯。
　　4、免疫組化表明COPD大鼠中β-catenin、Wnt5a、RhoA蛋白發(fā)生了異常表達分布。
　　實驗結(jié)論：
　　1、Wnt信號通路參與了COPD的氣道重塑。
　　2、Wnt信號通路與AECOPD患者肺功能受損程度存在相關(guān)性。
　　3、Wnt通路