過表達(dá)IL-8對三陰乳腺癌發(fā)展的影響及其機(jī)制的初步探究.pdf

1、目的：構(gòu)建含有白細(xì)胞介素8（IL-8）基因的重組腺病毒，觀察三陰乳腺癌細(xì)胞（Triple-negative breast cancer cells, TNBCs）過表達(dá)IL-8后，細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、遷移能力以及體內(nèi)成瘤能力的變化，并初步探究其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：劃痕愈合實驗檢測5株乳腺癌細(xì)胞的遷移能力，RT-PCR和ELISA法檢測細(xì)胞中內(nèi)源性IL-8 mRNA和蛋白表達(dá)水平。以人骨肉瘤143B細(xì)胞cDNA為模版， PCR擴(kuò)增

2、IL-8基因，與穿梭質(zhì)粒pAdTrack-TO4連接，電轉(zhuǎn)入AdEasier細(xì)菌中，獲得重組腺病毒質(zhì)粒pAdIL-8，酶切后轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞包裝擴(kuò)增并檢測滴度；AdIL-8感染Hs578T、BT549和MDA-MB-231細(xì)胞后，RT-PCR法檢測各株細(xì)胞中IL-8 mRNA水平，ELISA法檢測細(xì)胞上清液中IL-8蛋白水平；流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometer, FCM)檢測細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期情況；MTT法檢測細(xì)胞增殖活性；

3、劃痕愈合實驗及Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移能力。Western blot檢測過表達(dá)IL-8后對PI3K-Akt和MAPK信號通路的作用以及對CXCR1、CXCR2、E-cadherin、MMP2、Cyclin B1、Bcl-2和Caspase3表達(dá)的影響；裸鼠皮下成瘤實驗觀察過表達(dá) IL-8對MDA-MB-231細(xì)胞成瘤能力的影響。
　　結(jié)果：5株乳腺癌細(xì)胞中Hs578T遷移最快，BT549較快，MCF7和SKBr3遷移較慢

4、，MDA-MB-231最慢；Hs578T中IL-8表達(dá)水平最高，BT549次之，MDA-MB-231、MCF7和SKBr3 IL-8表達(dá)較低；PCR以及測序證實pAdTrack-TO4-IL-8構(gòu)建成功；pAdIL-8經(jīng)酶切證實重組正確；重組腺病毒AdIL-8感染Hs578T、BT549和MDA-MB-231細(xì)胞后，可高表達(dá)IL-8；過表達(dá)IL-8的細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)，且可將細(xì)胞周期阻滯于S期，但其增殖活性和凋亡情況無明顯變化。AdIL-