CHD1L基因在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的表達(dá)及功能的初步研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma，ICC)是位于肝細(xì)胞癌之后的第二大原發(fā)性肝臟惡性腫瘤，約占原發(fā)性肝臟惡性腫瘤的10-15％。雖然ICC診斷及治療方法發(fā)展迅猛，但是ICC患者的預(yù)后依然不良。導(dǎo)致ICC預(yù)后不良的最主要原因是腫瘤局部侵襲、血管、淋巴管轉(zhuǎn)移以及較難進(jìn)行根治性手術(shù)。因此，特異性標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)對臨床上早期診斷、早期治療ICC和評估ICC生存預(yù)后具有重要意義。

2、
　　CHD1L(Chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein1-like gene)是從人肝癌細(xì)胞的染色體1q21區(qū)分離的致癌基因，其編碼的蛋白由兩個(gè)解旋酶區(qū)域、一個(gè)C端宏功能域、核定位序列和兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)組成。CHD1L屬于SNF2-類家族，在DNA修復(fù)、維持染色體的穩(wěn)態(tài)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中扮演重要作用。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，CHD1L在肝癌、乳腺癌、胃癌等多種惡性實(shí)體瘤中呈過表達(dá)，且與腫瘤

3、遷移和侵襲有關(guān)。但其在ICC的侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用尚不清楚。
　　本課題目的是通過探討CHD1L基因在ICC組織及其細(xì)胞系中的表達(dá)水平和CHD1L與患者臨床病理因素和生存預(yù)后的關(guān)系，并通過干擾CHD1L的表達(dá)等方法探討其對ICC細(xì)胞系RBE增殖、遷移和侵襲的作用。
　　方法：
　　1、應(yīng)用免疫組化檢測80例ICC組織和30例癌旁組織切片中CHD1L的表達(dá)情況，并分析CHD1L的表達(dá)與ICC患者臨床病理因素及生存預(yù)后的關(guān)聯(lián)

4、。
　　2、采用Western Blot和qRT-PCR法檢測4種ICC細(xì)胞系（RBE、HCCC-9810、HUCCT1、QBC939）和正常肝內(nèi)膽管細(xì)胞HIBEpic中CHD1L蛋白和mRNA的表達(dá)。
　　3、構(gòu)建干擾質(zhì)粒CHD1L-RNAi，干擾ICC細(xì)胞系RBE中CHD1L的表達(dá)后，用Western Blot法檢測CHD1L蛋白表達(dá)水平的變化；然后利用CCK-8法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、Transwell遷移和侵

5、襲實(shí)驗(yàn)檢測RBE增殖、遷移和侵襲的變化。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料采用（-x±S）表示，合理運(yùn)用配對t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、生存分析及Cox回歸分析等統(tǒng)計(jì)方法，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組化檢測了80例ICC組織和30例癌旁組織切片CHD1L的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)CHD1L主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，和正常肝膽管組織相比，在癌組織中呈高表達(dá)；CHD1L表達(dá)與ICC患者的

6、分化程度（P=0.011）、血管侵犯（P=0.002）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.008）和TNM分期（P=0.001）指標(biāo)顯著相關(guān)，差異具有顯著性（P＜0.05）。生存曲線分析表明CHD1L高表達(dá)的患者預(yù)后不良，且Cox單因素及多因素比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析表明CHD1L是ICC患者獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)志。
　　2、與正常肝內(nèi)膽管細(xì)胞HIBEpic相比，CHD1L蛋白和mRNA在ICC細(xì)胞中的表達(dá)均上調(diào)，尤其是在ICC細(xì)胞系RBE。
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