同電荷物質促進蛋白質復性的研究.pdf

1、蛋白質復性是利用基因重組技術生產藥用蛋白的關鍵步驟。本文針對蛋白質復性過程中聚集體的形成,在已發(fā)現(xiàn)的同電荷離子交換凝膠介質能夠抑制蛋白質聚集、輔助蛋白質復性的基礎上,探索同電荷固相介質的性質對其輔助蛋白質復性效果的影響,并對同電荷聚合物輔助蛋白質復性的機理進行了研究。
　　首先,利用分散聚合法合成了具有不同粒徑的單分散聚甲基丙烯酸縮水甘油酯(PGMA)微球,并在其表面接枝聚乙烯亞胺分子(PEIL/S),制備得到一系列具有不同性質的

2、陽離子微球。將制備得到的PGMA-PEIL/S微球應用于同樣帶有正電荷還原變性的溶菌酶(DR-LYS)的氧化復性,考察了微球性質對蛋白復性效果的影響。結果表明,微球表面的電荷密度是影響同電荷介質輔助蛋白復性效果的關鍵因素,高電荷密度的微球更有利于促進蛋白質復性。此外,微球粒徑越小,其輔助復性效果越好;微球的配基結構對其輔助復性的效果無影響;同電荷介質與尿素在抑制蛋白質聚集方面機制不同,二者具有協(xié)同作用。
　　上述研究表明,同電荷微

3、球的電荷密度與其促進蛋白質復性效果正相關,因此本文提出了二次修飾方法以提高PGMA微球的電荷密度。即在PGMA微球表面一次修飾PEIL/S后,再二次修飾2-二乙氨基氯乙基(DEAE)或PEIS。結果表明,二次修飾微球的電荷密度及BSA靜態(tài)吸附容量相對一次修飾微球均有大幅提高。相對于一次修飾微球,二次修飾微球具有更好的輔助復性效果,體現(xiàn)在更高的復性收率和更低的介質使用量上。同時,具有更高電荷密度的二次修飾微球在復性中的鹽敏感度更低,故在較

4、高鹽濃度的復性體系中也能有效地促進蛋白質復性。二次修飾微球的配基結構同樣對輔助復性效果沒有影響。
　　用聚電解質代替荷電微球構建均相復性系統(tǒng),對該均相的復性體系進行實時熒光或濁度測定,研究蛋白質折疊或聚集動力學,以揭示同電荷荷電介質或聚合物輔助蛋白質復性的機理。結果表明,在同電荷聚合物促進蛋白質復性中,存在臨界電荷比值Rc(溶液中聚電解質與蛋白質總電荷比)和臨界聚電解質Mc(最低的臨界聚電解質分子量),在Rc值及Mc值以上,才能達