RRM1、BRCA1在晚期NSCLC的表達與吉西他濱-鉑類治療臨床研究.pdf

1、背景與目的：
　　肺癌是排名首位的腫瘤致死疾病，其中非小細胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer, NSCLC）的所占比例為總量的85％左右。在新發(fā)肺癌病例中約2/3以上的患者確診時已屬晚期（ⅢB／Ⅳ期），無法再進行根治切除，只能選用更為保守的放化療。對于晚期非小細胞肺癌的標(biāo)準(zhǔn)化療方案為含鉑的兩聯(lián)療法，其中吉西他濱聯(lián)合鉑類(GP)是常用的方案，并在晚期肺鱗癌中作為一線治療方案之一。研究報道吉西他濱聯(lián)合鉑類方案

2、治療晚期非小細胞肺癌的客觀緩解率為30%~40%，中位生存率8~10個月，總體上五年生存率低于15%，且治療后的腫瘤緩解情況存在明顯的個體差異。
　　許多抗癌藥物針對DNA作為靶點，腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性與其自身DNA的損傷修復(fù)能力密切相關(guān)。RRM1和 BRCA1基因是核苷酸切除修復(fù)（Nucleotide Excision Repair，NER）系統(tǒng)中的兩個重要成員。吉西他濱是嘧啶類抗代謝化療藥物核苷酸類似物，與RRM1相應(yīng)位

3、點結(jié)合,核糖核苷酸還原酶的功能受到干擾導(dǎo)致脫氧核苷酸的合成減少，最終影響DNA的合成。所以，在整個非小細胞肺癌的治療過程當(dāng)中，監(jiān)測患者體內(nèi)的 RRM1的數(shù)量以及狀態(tài)十分必要，需要我們更加重視對這項技術(shù)的研究和改進。BRCA1作為一種抑癌基因，參與細胞各種應(yīng)答反應(yīng)?；仡櫺匝芯拷Y(jié)果分析，含鉑方案化療的NSCLC患者， BRCA1低、中表達者較高表達者死亡風(fēng)險明顯降低，可能預(yù)示著高表達BRCA1基因的患者對含鉑類療效差或耐藥。提示BRCA1可

4、作為一個NSCLC重要預(yù)后和化療預(yù)測性因素。為明確GP化療方案兩種藥物對療效的影響，解決對非小細胞肺癌治療敏感性問題，我們擬收集接受GP方案治療晚期非小細胞肺癌患者的血液和組織標(biāo)本，檢測RRM1和BRCA1基因表達量和化療反應(yīng)及預(yù)后的關(guān)系。
　　本研究使用熒光實時定量方法檢測晚期非小細胞肺癌患者腫瘤組織和外周血 RRM1與BRCA1表達，得到相應(yīng)的數(shù)據(jù)，然后與病人的臨床表現(xiàn)以及化療效果相結(jié)合，整理出一個更加可行的檢測方法，從而對吉

5、西他濱聯(lián)合鉑類方案化療法的效果進行預(yù)測，從而在臨床治療決策中可以對非小細胞肺癌的化療方案選擇進行進一步的改進和完善。非小細胞肺癌患者痰液脫落細胞檢測微小染色體維持蛋白5基因表達，以及血液中檢測循環(huán)腫瘤細胞計數(shù)臨床研究，采用多種方式進行針對非小細胞肺癌的診斷研究，期望尋找到對肺癌疾病合適、方便、易行、敏感的檢測手段。
　　研究方法：
　　確診為ⅢB／Ⅳ期晚期非小細胞肺癌患者，采用吉西他濱/順鉑組成的NSCLC化療方案，對外周血

6、和腫瘤組織標(biāo)本的RRM1和BRCA1 mRNA基因進行實時定量熒光PCR檢測。首先,對RRM1和BRCA1 mRNA表達水平和病人臨床表現(xiàn)、性別、病癥程度、是否吸煙關(guān)系進行分析。其次,對 RRM1和 BRCA1 mRNA表達與 GP方案化療療效的關(guān)系進行分析。第三,分析患者的臨床及病理特征、RRM1和BRCA1 mRNA表達與生存時間之間關(guān)系。對痰液脫落細胞進行微小染色體維持蛋白5基因表達檢測,設(shè)計方法使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PC

7、R)半定量流程，以及檢測非小細胞肺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞計數(shù)，使用流式細胞分析聯(lián)合免疫磁珠富集技術(shù)。
　　結(jié)果：
　　RRM1、BRCA1高表達與低表達組間，患者的年齡、性別、吸煙狀況、TNM分期、病理類型之間都不存在顯著差異。在外周血中RRM1和BRCA1之間不存在相關(guān)性。外周血和腫瘤組織中 RRM1的表達量呈顯著正相關(guān)，外周血和腫瘤組織中BRCA1的表達量呈顯著正相關(guān)。RRM1和BRCA1低表達組的治療效果優(yōu)于高表達組

8、，而外周血和腫瘤組織中二者表達水平呈顯著正相關(guān)，提示外周血檢測RRM1和BRCA1基因表達水平可能作為預(yù)測晚期非小細胞肺癌患者接受GP方案化療的預(yù)測因子。對痰液脫落細胞進行微小染色體維持蛋白5基因表達檢測,設(shè)計方法使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量流程，以及非小細胞肺癌患者隨著TNM分期的增高，外周血循環(huán)腫瘤細胞計數(shù)分級以及CTCS數(shù)目有增多的趨勢。
　　結(jié)論：
　　RRM1和BRCA1低表達組的非小細胞肺癌患者在

9、接受吉西他濱聯(lián)合鉑類方案進行化療時，所產(chǎn)生的治療效果更佳，可以延長患者生存期。外周靜脈血和肺癌組織中RRM1和BRCA1表達呈顯著正相關(guān)，可以利用相對便利且應(yīng)用廣泛的方法對外周血中RRM1和BRCA1基因表達進行檢測來預(yù)測GP方案化療反應(yīng)?？梢愿佑嗅槍π缘慕o病人制定治療方案，分析哪些的非小細胞肺癌患者接受吉西他濱聯(lián)合鉑類方案進行化療，效果更好。通過痰脫落細胞檢測MCM5,對肺癌患者早期診斷提供有效手，非小細胞肺癌患者分級檢測外周血循環(huán)