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文檔簡介
1、目的:
探索絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶2(serine hydroxymethyl transferase2,SHMT2)在小鼠肝再生過程中的表達規(guī)律,以及其在小鼠肝再生過程中發(fā)揮的作用。
方法:
1.SPF級 C57BL/6小鼠90只分為肝切除組(2/3PH)50只、假手術(shù)組(Sham組)10只、尾靜脈注射攜帶 SHMT2 shRNA腺病毒組(shSHMT2組)10只、尾靜脈注射陰性對照腺病毒組(Control組
2、)10只、尾靜脈注射生理鹽水空白對照組(NS組)10只。小鼠肝切除之后,記錄切除肝臟的重量,并在對應(yīng)的時間點1、3、5、7、9d收集肝臟組織及血清。同時收集Sham組的肝臟組織及血清,用qPCR、Western blot(WB)和免疫組化檢測 SHMT2及其下游分子甘氨酸脫羧酶(glycine decarboxylase,GLDC)的變化規(guī)律,自動生化分析儀檢測血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT
3、)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate transaminase,AST)的水平。
2.取shSHMT2組、Control組及NS組的小鼠肝臟組織,冰凍切片觀察綠色熒光強度,Western blot檢測SHMT2表達量驗證腺病毒的干擾效率,用免疫組化法檢測三組肝臟組織中增殖細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)的表達,比較三者肝再肝臟重量、肝再生度、肝指數(shù)及小鼠血清中的ALT、
4、AST水平。
結(jié)果:
SHMT2及其下游分子 GLDC,均在2/3肝切除術(shù)后開始升高,并分別在小鼠肝再生的后第5天,第7天達到峰值,qPCR結(jié)果揭示了與WB相似的趨勢,SHMT2 mRNA表達量逐漸上升在第5天達到最高為第1天的1.63倍(P<0.05)。在干擾 SHMT2之后,NS組與shSHMT2組比較,再生肝臟的重量由(0.79±0.13) g降低至(0.63±0.11) g(P<0.05),再生度由(36.3
5、7±2.21)%降低至(31.33±1.92)%,肝指數(shù)由(3.76±0.44)%降低至(3.13±0.29)%,并且肝功能指標(biāo) ALT由(70.00±9.52) U/L升高至(154.15±16.49) U/L,AST由(140.09±32.85) U/L升高至(403.41±68.63) U/L(P<0.05),PCNA陽性率從(53.6±2.3)%降低至(39.0±3.2)%(P<0.05)。
結(jié)論:
1. S
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