基于功能化介孔二氧化硅載體的漆酶固定化研究.pdf

1、酶在許多領域已得到應用，但游離酶容易受環(huán)境影響失去活性，而固定化酶比較穩(wěn)定，對抑制劑敏感性低，可以重復使用。
　　本研究通過實驗制備介孔二氧化硅載體，并對其進行表面修飾得到官能化介孔二氧化硅載體，并以上述載體對漆酶進行固定化。研究不同的官能團（氨基和乙烯基）和不同固定化方法（交聯(lián)吸附法和吸附法）對漆酶固定化的影響。通過考察漆酶的固定量來討論不同官能團對漆酶固定化的影響;通過測試固定化漆酶的酶活及其酶活回收率，探討不同方法對固定漆酶

2、的影響。最后研究固定化漆酶的性質，并與游離漆酶的性質進行對比分析。
　　(1)游離白腐真菌漆酶活性測試條件優(yōu)化。實驗結果表明，測定酶活的最適合條件為:波長600nm、pH值4.0、反應溫度30℃、緩沖溶液的濃度0.1mol/L。動力學曲線:反應1-5min內，反應符合線性方程y=0.0097x-0.0016;隨時間增加，反應速率增加趨勢減小，16min反應終止。
　　(2)官能團對漆酶吸附法固定化影響研究。研究發(fā)現(xiàn)，SBA-

3、15的載酶量是300.2mg/g，SBA-15-NH2的載酶量是176.8mg/g，SBA-15-CH=CH2的載酶量是51.6mg/g。由此可見，官能團的引入降低了吸附法固定化漆酶的載酶量，尤其是乙烯基影響顯著。
　　(3)吸附法和交聯(lián)吸附法漆酶固定化的影響因素研究。在吸附法固定漆酶的最優(yōu)條件下（固定時間5h、最適合漆酶濃度0.5mg/mL、最適合反應pH5）固定漆酶的酶活是3005U/g，酶活力回收率為60.1％;在交聯(lián)吸附固

4、定漆酶的最優(yōu)條件下（交聯(lián)時間7h、固定化時間7h、酶濃度1.5mg/mL、戊二醛濃度6％）固定化漆酶的酶活是3615U/g，酶活力回收率是72.3％。由此可見，交聯(lián)吸附法優(yōu)于吸附法。
　　(4)固定化漆酶（SBA-15-NH2為載體）與游離漆酶的性質對比分析。固定化漆酶最適溫度是50℃，游離漆酶最適溫度是30℃;固定化漆酶最適pH為4.5，游離漆酶最適pH為4;儲存20天后酶活力:吸附法固定漆酶活力為初始69％;交聯(lián)吸附法活力為初