白藜蘆醇抑制LoVo細(xì)胞增殖與BMP9-p38MAPK的關(guān)系研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　分析白藜蘆醇對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用及可能的分子機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　本實(shí)驗(yàn)主要運(yùn)用結(jié)晶紫染色、流式、免疫熒光、熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒、PCR、Western blot、H&E染色和免疫組織化學(xué)等技術(shù)，研究分析白藜蘆醇對(duì) LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用與骨形態(tài)蛋白9（ bone morphogenetic protein9, BMP9）和p38 MAPK信號(hào)之間的關(guān)系及其可能的機(jī)制。具體實(shí)驗(yàn)如下：

2、>　　1.運(yùn)用結(jié)晶紫染色、Western blot、PCR和免疫熒光等實(shí)驗(yàn)方法,檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo增殖、凋亡和周期的影響。
　　2.利用裸鼠體內(nèi)異位成瘤實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)結(jié)腸癌的作用。
　　3.采用報(bào)告質(zhì)粒檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)BMP/Smad信號(hào)的影響。
　　4.分別采用RT-PCR和Western blot檢測(cè)白藜蘆醇在LoVo細(xì)胞中對(duì)BMP9、Smad1/5/8和Smad1/5/8磷酸化水平（p-Smad

3、1/5/8）的影響。
　　5.采用Western blot檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)LoVo細(xì)胞中p38以及p38磷酸化水平（p-p38）的影響
　　6.分別利用沉默和過表達(dá) BMP9重組腺病毒處理細(xì)胞，檢測(cè)在BMP9對(duì)白藜蘆醇抑制LoVo細(xì)胞增殖作用的影響，以及對(duì)p38與p-P38水平的影響。
　　7.采用p38 MAPK抑制劑（SB）處理LoVo細(xì)胞，分析p38 MAPK對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的影響,以及白藜蘆醇和/或SB對(duì)LoV

4、o細(xì)胞中p38、p-p38 MAPK水平的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.白藜蘆醇抑制LoVo細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡和周期阻滯。
　　2.白藜蘆醇在體內(nèi)能抑制結(jié)腸癌腫瘤的生長。
　　3.白藜蘆醇明顯促進(jìn) LoVo細(xì)胞中 BMP9的表達(dá)，但抑制經(jīng)典BMP/Smad信號(hào)。
　　4. BMP9過表達(dá)可增強(qiáng)白藜蘆醇對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的抑制作用，而沉默表達(dá)則減弱白藜蘆醇對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用。
　　5.白

5、藜蘆醇降低p-Smad1/5/8蛋白水平，升高p-p38 MAPK的水平；BMP9過表達(dá)后進(jìn)一步增加 p-p38MAPK水平；但沉默表后， p-p38MAPK的水平有一下調(diào)趨勢(shì)。
　　6.白藜蘆醇能上調(diào) LoVo細(xì)胞中 p-P38 MAPK的蛋白水平，p38 MAPK的抑制劑SB促進(jìn)LoVo細(xì)胞增殖，并部分翻轉(zhuǎn)白藜蘆醇和BMP9對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論：
　　白藜蘆醇能抑制LoVo細(xì)胞增殖，并促進(jìn)凋