P16-Ki67蛋白檢測(cintec plus雙染技術(shù))在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷及宮頸癌篩查中應(yīng)用價(jià)值探討.pdf

1、背景:
　　宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，近年來，國內(nèi)外均有報(bào)道宮頸癌的發(fā)病呈現(xiàn)年輕化傾向，35歲以下的宮頸癌病例出現(xiàn)上升趨勢，嚴(yán)重危害著婦女的健康，因此宮頸癌的篩查和預(yù)防具有重要意義。而宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepithelial neoplasias，CIN)是與宮頸癌密切相關(guān)的一組癌前病變的總稱，包括宮頸上皮不典型增生（cervical epithelial dysplasia）和宮頸原位癌(carci

2、noma insitu, CIS)。它反映宮頸癌發(fā)生發(fā)展的連續(xù)過程，此階段持續(xù)時(shí)間較長，可達(dá)10-20年，而從宮頸不典型增生到原位癌及浸潤癌是個(gè)長期的發(fā)展過程，要預(yù)防宮頸癌的發(fā)生，關(guān)鍵是宮頸上皮內(nèi)瘤變的篩查工作[1]。目前，宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷方法主要有:宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查、人乳頭瘤病毒(HPV)檢測、陰道鏡檢查、診斷性宮頸錐切術(shù)和病理活檢、基因診斷等，中華醫(yī)學(xué)會(huì)推薦的宮頸病變?cè)\斷的三階梯程序?yàn)榧?xì)胞學(xué)、陰道鏡及宮頸活檢[2]。但這種傳統(tǒng)

3、的診斷方法沿用至今，除了認(rèn)同它們的診斷有效性外，也要認(rèn)識(shí)到它們?cè)谀承┓矫娴木窒扌?。宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查是目前比較常用的宮頸癌篩查方法，但由于此項(xiàng)檢查通過病理醫(yī)生顯微鏡下的肉眼觀察進(jìn)行診斷，當(dāng)一些感染因素導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)不典型時(shí)，主要憑借病理醫(yī)生本身的經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷，存在一定的假陰性和假陽性率;陰道鏡檢查和宮頸活檢，作為一種創(chuàng)傷性檢查，可以對(duì)疑似病例進(jìn)行確診，但并不能針對(duì)所有就診病例都常規(guī)進(jìn)行篩查，應(yīng)用范圍較狹窄。因此，尋找簡便有效的新型檢測方法

4、輔助臨床診斷勢在必行。
　　在真核細(xì)胞中，細(xì)胞分裂的進(jìn)展受到各種細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白的控制性表達(dá)和轉(zhuǎn)錄后修飾。P16INK4a是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(pRb)介導(dǎo)的G1/S期轉(zhuǎn)化控制的一部分，并可觸發(fā)細(xì)胞周期停止在細(xì)胞分化過程當(dāng)中。正常細(xì)胞周期進(jìn)展中表達(dá)的P16INK4a表現(xiàn)出的是一種抗增殖效應(yīng)。在終末分化的上皮細(xì)胞中，P16INK4a的表達(dá)被下調(diào)到免疫細(xì)胞化學(xué)方法通常不能檢出的水平[3]。而Ki67是一種細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白，只可在增殖細(xì)

5、胞的細(xì)胞核中檢出，G0期的靜息細(xì)胞不表達(dá)這種抗原[4]。由于過度表達(dá)P16INK4a的細(xì)胞只有在細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制受損后才會(huì)活躍地增殖，所以，在正常生理?xiàng)l件下，同一細(xì)胞內(nèi)的增殖標(biāo)記物Ki67和P16INK4a應(yīng)當(dāng)相互排斥。當(dāng)宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)Ki67和P16INK4a時(shí)，我們是否可推斷相應(yīng)細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞周期調(diào)控失常。
　　本研究基于以上科學(xué)推測，在傳統(tǒng)診斷方法的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法，檢測宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本中P16INK

6、4a和Ki67蛋白，以宮頸活檢結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)該檢測方法在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷和宮頸癌篩查中的可靠性及臨床應(yīng)用的可行性。
　　目的:
　　研究P16/Ki67蛋白檢測（cintec plus雙染技術(shù)）在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷價(jià)值及宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值。
　　方法:
　　采用BD Surepath細(xì)胞學(xué)采樣器收集常規(guī)門診和體檢人群宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，使用羅氏公司生產(chǎn)的抗P16(E6H4)/Ki67(274-11

7、AC3)單克隆抗體雞尾酒試劑進(jìn)行cintec plus雙染法檢測。以宮頸活檢結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算靈敏度、特異度、總符合率等評(píng)價(jià)指標(biāo)。同時(shí)計(jì)算目前常規(guī)宮頸癌篩查方法——宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢查的靈敏度、特異度、總符合率等指標(biāo)，運(yùn)用配對(duì)x2檢驗(yàn)，比較cintec plus雙染法與宮頸液基細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。評(píng)價(jià)cintec plus雙染法在宮頸上皮內(nèi)瘤變的診斷及宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值。最后，評(píng)價(jià)兩者聯(lián)合試驗(yàn)對(duì)臨床宮頸癌及癌前病變

8、的篩查的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
　　結(jié)果:
　　共收集各類標(biāo)本104例，cintec plus雙染法的靈敏度（陽性符合率）為80.00％(95％CI:62.70％-90.50％)，漏診率20.00％，特異度（陰性符合率）為75.68％(95％CI:64.79％-84.02％)，誤診率24.32％，總體符合率為76.92％(95％CI:67.95％-83.97％)，Kappa值為0.5，陽性似然比(+LR)為3.3，陰性似然比（-LR

9、）為0.26，Youden指數(shù)即正確指數(shù)(YI)為0.56。
　　宮頸液基細(xì)胞學(xué)的靈敏度60.00％，漏診率40％，特異度83.78％，誤診率16.22％，總符合率76.92％，Kappa值0.44，陽性似然比3.7，陰性似然比0.48，Youden指數(shù)(YI)0.44。
　　兩者并聯(lián)聯(lián)合試驗(yàn)的靈敏度83.3％，特異度68.9％，Kappa值0.45，約登指數(shù)0.522。
　　結(jié)論:
　　P16/Ki67蛋白檢測